При некоторых микробиологических исследованиях возникает необходимость посева определенного количества микробных тел в жидкую или плотную питательную среду. В таких случаях из микробной культуры, предназначенной для посева, пользуясь бактериальным стандартом мутности, готовят взвесь, содержащую в единице объема (1 мл) заданное количество микробных тел.
Государственным научно-исследовательским институтом стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича изготовлен отраслевой стандартный образец мутности ОСО 42-28–85–02П[1] для визуального определения концентрации микробной взвеси.
Комплект ОСО 42-28-85–02 состоит из двух пробирок-эталонов, соответствующих 10 и 5 единицам мутности.
Эталон ОСО на 10 единиц мутности ориентировочно соответствует следующим концентрациям клеток в 1 мл:
0,93х109 клеток/мл для микробов кишечной группы;
11х109 клеток/мл для микробов коклюшной группы;
1,7х109 клеток/мл для бруцеллезных микробов;
2,2х109 клеток/мл для холерного вибриона;
5х109 клеток/мл для туляремийных микробов.
Перед началом каждого измерения пробирку эталона ОСО, держа в руке в горизонтальной плоскости, нерезко встряхивают в течение 10–15 с с амплитудой 50–100 мм и частотой встряхивания 1–2 раза в секунду. Затем исследуемую бактериальную взвесь наливают в объеме 6–7 мл в пробирку, входящую в комплект ОСО, что соответствует объему наполнения жидкостью ОСО.
Исследуемая бактериальная взвесь должна быть гомогенной с равномерным распределением частиц взвеси в пробирке. Пробирку ОСО совмещают с исследуемой бактериальной взвесью в вертикальном положении на уровне глаз, приложив плотно к задней поверхности шрифтовую таблицу. Пробирки освещаются равномерно источником рассеянного света, которым могут быть люминесцентная лампа мощностью от 20 до 40 Вт, лампа накаливания матовая (с плафоном) мощностью от 40 до 60 Вт, а также рассеянный дневной свет.
В случае одинаковой четкости видимых элементов шрифтовой таблицы через ОСО и пробирку с исследуемой бактериальной взвесью мутность их считают одинаковой, равной мутности, указанной на этикетке ОСО. Если мутность исследуемой бактериальной взвеси не совпадает с пробиркой эталона ОСО, прибегают к уравниванию мутности, добавляя в зависимости от существующего различия физиологический раствор или микробную взвесь высокой концентрации[2].
8.3.1. Стандарт мутности по McFarland
Стандарт мутности по McFarland (МcF) также используется при приготовлении бактериальной суспензии определенной мутности. Методика его изготовления заключается в следующем:
- • Изготавливаются растворы: ВаСl2 – 1 %,
Н2SO4 — 1 %.
ВНИМАНИЕ! ВаСl2 – ядовитое вещество; Н2SO4 – обжигающее вещество.
- Для приготовления стандарта мутности и бактериальной взвеси, подлежащей исследованию, подбираются пробирки одного диаметра.
- В пробирки изготавливаемого стандарта разливается Н2SO4 в объеме, указанном в табл. 8.2, и к ней добавляется раствор ВаСl2 для получения общего объема 10 см3.
- Пробирки с изготовленным стандартом тщательно закрываются завинчивающимися пробками и заливаются сургучом.
При изготовлении исследуемой бактериальной суспензии необходимо проследить, чтобы жидкость в стандарте МсF и исследуемой пробирке была гомогенно мутной.
Количественная характеристика исследуемой микробной взвеси определяется сравнением с ближайшими по мутности пробирками тем же способом, как при использовании ОСО 42-28-85-02.
Таблица 8.2. Количественная оценка бактериальных взвесей по шкале МсРаНапс!
|
Номер по шкале МсF |
Объем, см3 |
Приблизительное количество, микроб/см3 |
Соответствующая микробная взвесь, х108/мл |
|
|
Н2SO4 1 % |
ВаСl2 1 % |
|||
|
0,5 |
9,95 |
0,05 |
1х108 |
1,5 |
|
1 |
9,9 |
0,1 |
3х108 |
3 |
|
2 |
9,8 |
0,2 |
6х108 |
6 |
|
3 |
9,7 |
0,3 |
9х108 |
9 |
|
4 |
9,6 |
0,4 |
12х108 |
12 |
|
5 |
9,5 |
0,5 |
15х108 |
15 |
|
6 |
9,4 |
0,6 |
18х108 |
18 |
|
7 |
9,3 |
0,7 |
21х108 |
21 |
|
8 |
9.2 |
0.8 |
24×108 |
24 |
|
9 |
9,1 |
0,9 |
27х108 |
27 |
|
10 |
9,0 |
1,0 |
30х108 |
30 |
[1] Последние две цифры в номере ОСО означают год его выпуска.
[2] Стандартный образец мутности ГНИИСК МБП им. ЛАТарасевича внесен в реестр отраслевых стандартных образцов медицинских иммунологических препаратов, допущенных к применению в системе Минздрава РФ и на предприятиях других ведомств, выпускающих иммунологические препараты.
Мы используем стандарт 0,5 McFarland, в частности, потому что представляет количество бактерий в данном диапазоне для стандартизации микробных тестирования . Уважаемый Алла, CLSI рекомендует использовать бактерии с McFarland 0,5 мутности для антимикробных испытаний. Количество ячеек в McFarland 0,5 варьируется на основе размера клеток.
Что такое 0,5 мутности McFarland?
0,5 Стандарт мутности McFarland обеспечивает оптическую плотность, сопоставимую с плотностью бактериальной суспензии 1,5x 10^8 единиц формирования колоний (КОЕ/мл). 0,5 Стандарт McFarland доступен в продаже.
Как изменить мутность на 0,5 McFarland?
a 0,5 стандарт McFarland готовится путем смешивания 0,05 мл из 1,175% дигидрата хлорида бария (Bacl 2 ¢ 2h 2 o), с 9,95 мл 1% серная кислота (H 2 SO 4 ). Теперь есть стандарты McFarland, приготовленные из суспензий частиц латекса, что удлиняет срок годности и стабильность суспензий.
Сколько КОЕ в стандарте 0,5 McFarland?
0,5 Стандарт мутности McFarland обеспечивает оптическую плотность, сопоставимую с плотностью бактериальной суспензии с формированием колонии 1,5 x 10^8 (КОЕ/мл).
Что такое зона ингибирования?
Зона ингибирования представляет собой круглую область вокруг места антибиотика, в котором колонии бактерий не растут. Зона ингибирования может быть использована для измерения восприимчивости бактерий к палатам антибиотика.
Что такое техника Кирби Бауэра?
Тест Кирби-Бауэра, известный как метод диффузии диска, является наиболее широко используемым тестом на антибиотики при определении того, какой выбор антибиотиков следует использовать при лечении инфекции . … Организм будет расти на агаровой пластине, в то время как антибиотик – «рабочие», чтобы препятствовать росту.
Что такое количество КОЕ?
Колония формирующая единица, или КОЕ, представляет собой единицу, обычно используемой для оценки концентрации микроорганизмов в тестовой выборке . Количество видимых колоний (КОЕ), присутствующих на агаровой пластине, может быть умножено на коэффициент разбавления, чтобы обеспечить результат КОЕ/мл.
Какие бактерии растет на агаре Мюллера Хинтона?
Агар Мюллера-Хинтона-это микробиологическая среда роста, которая обычно используется для тестирования восприимчивости к антибиотикам, в частности, тестов на диффузию диска. Он также используется для изоляции и поддержания neisseria и moraxella pipes .
Что можно определить с помощью E -теста?
Etest (ранее известный как тест на эпсилометр) представляет собой способ определения антимикробной чувствительности путем размещения полосы, пропитанной антимикробными препаратами на агарную пластину. Штамм бактерии или гриба не будет расти вблизи концентрации антибиотиков или противогрибковых видов, если она чувствительна.
Каковы различные методы тестирования чувствительности?
in vitro Антимикробные тестирование восприимчивости может быть проведено с использованием различных форматов, наиболее распространенным является диффузия диска, разбавление агара, макродилюция бульона, микродилюция бульона и тест градиента концентрации .
Каков тест McFarland стандарт антимикробной восприимчивости?
Стандарты McFarland обычно используются в тесте восприимчивости к антибиотикам (AST) для стандартизации приблизительного количества бактерий в жидкой суспензии или культуре бульона бактериальной клетки путем сравнения мутности культивированной испытательной суспензии с стандартом McFarland.
Какое устройство используется для количества ячеек, определяемых стандартным количеством пластин?
Колоний-формирующий блок (КОЕ, КОЕ, КОЕ) -это единица, используемая в микробиологии для оценки количества жизнеспособных бактерий или грибковых клеток в образце.
Какое максимальное количество антимикробного диска на 150 -миллиметровой пластине?
Можно размещать максимум шесть дисков в 9-сантиметровую чашку Петри и 12 дисков на табличке 150 мм. Уменьшите количество дисков, применяемых на пластину, если встречаются перекрывающиеся зоны ингибирования.
Что это значит, если нет зоны ингибирования?
a Отсутствие зрительной зоны не означает, что антимикробный агент неэффективен: зона теста на ингибирование требует, чтобы антимикробный агент мигрировал в агар питательных веществ. Если антимикробное средство не совместимо с агаром питательных веществ, он не будет мигрировать, чтобы создать визуальную зону ингибирования.
Как проверить антибактериальную активность?
Различные лабораторные методы могут быть использованы для оценки или проверки антимикробной активности in vitro экстракта или чистого соединения. Наиболее известными и основными методами являются методы диффузия и бульон или разбавление агара . Другие методы используются специально для противогрибкового тестирования, таких как метод отравленной пищи.
Что говорит вам размер зоны ингибирования?
Размер зоны ингибирования обычно связан с уровнем антимикробной активности, присутствующей в образце или продукте – более крупная зона ингибирования обычно означает, что антимикробное препарат более мощный.
Как вы рассчитываете зону ингибирования?
возьмите линейку или суппорт, который измеряет в миллиметрах и поместите «0» в центр антибиотического диска. Измеряйте от центра диска до края площади с нулевым ростом. Возьмите свое измерение в миллиметрах. Это измеряет радиус зоны ингибирования.
Какие факторы влияют на зону ингибирования?
Существует множество факторов, которые определяют размер зоны ингибирования в этом анализе, включая растворимость лекарственного средства, скорость диффузии лекарственного средства через агар, толщина агарной среды и концентрация лекарственного средства, пропитанную в диск < /b>.
Являются ли бактерии в зоне ингибирования?
Вы правы, что бактерии не могут быть мертвы в зоне ингибирования или в концентрации MIC. Если антибиотик статичен, а не цидальный, они могут просто не выросли.
Почему мы принимаем OD на 600 нм?
Оптическая плотность измеряет степень рассеяния света, вызванную бактериями внутри культуры; Чем больше бактерий, тем больше свет разбросан. Длина волны 600 нм специально выбрана для бактериальных измерений OD, потому что, в отличие от длины волн ультрафиолетового излучения, 600 нм не вредно для культуры .
Какова цель использования стандарта McFarland с настройкой эксперимента по диффузии диска?
Стандарты McFarland используются для приготовления бактериальных суспензий к указанной мутности . В протоколе теста на диффузию диффузии диффузии на диск Кирби-Бауэра бактериальная суспензия организма, которая должна быть проверена, должна быть эквивалентна стандарту 0,5 Макфарланда.
Как сделать агар Мюллера Хинтона?
Как подготовить агар Мюллера Хинтона?
- Приостановка 38 г порошка агара Мюллера Хинтон (CM0337B) в 1 л дистиллированной воды.
- Смешайте и полностью растворите их.
- Стерилизовать автоклавированием при 121 ° C в течение 15 минут.
- Вылейте жидкость в блюдо Петри и подождите, пока среда затвердевает.
Артикул: 70900
Производитель: bioMerieux SA
Фасовка: 6 шт
-
1. Заполните заявку по шаблону
-
2. Отправьте заявку на почту zakaz@omb.ru
Мы уточним все детали по заявке и подготовим договор о сотрудничестве и/или счет -
3. Согласуйте и подпишите договор. Отправьте его ответным письмом
-
4. Оплатите счет по вашему заказу
После оплаты счета мы приступаем к сборке заказа и готовим его к отправке -
5. Примите ваш заказ с доставкой или заберите самовывозом со склада ОМБ
Более подробную информацию можной найти в разделе Условия покупки
Товары в этой категории
Вы смотрели
R092R Test tubes (McFarland standard test)
Пробирки для тестирования (Стандарты мутности МакФарланда)
Набор содержит 5 пробирок по 10 мл, размеры пробирок 15×103 мм (по одной пробирке каждого стандарта МакФарланда: 0.5, 1, 2, 3 и 4 ед.)
Стандарты мутности МакФарланда предназначены для определения мутности бактерийных взвесей в воде, растворах или в жидких питательных средах методом визуального сравнения. Это обеспечивает стандартизацию количества бактерий в суспензии для проведения тестов на чувствительность или других тестов, требующих стадартизации инокулята (тест на высеваемость и т.д.), без использования спектрофотометрических методов.
Условия хранения и срок годности:
Хранить при температуре 2-80С, оберегая от воздействия прямых солнечных лучей после каждого использования. Срок годности – 2 года.
Набор содержит:
R092A (стандарт 0,5 ед.) – 1 пробирка
R092B (стандарт 1 ед.) – 1 пробирка
R092C (стандарт 2 ед.) – 1 пробирка
R092D (стандарт 3 ед.) – 1 пробирка
R092E (стандарт 4 ед.) – 1 пробирка
Приготовление:
Приготовить инокулят культуры, предназначенной для тестирования, используя стерильный раствор. Сравнить мутность полученной суспензии с мутностью стандарта МакФарланда. Стандарты должны быть тщательно перемешаны, до получения однородной суспензии.
Откорректировать мутность бактериальной суспензии или добавлением раствора (если суспензия более мутная), или добавлением культуры (если мутность недостаточна).
Проверить оптическую плотность стандарта мутности МакФарлайна 0,5 единиц с помощью спектрофотометра, используя 1 см кювету. Поглощение при длине волны 625 нм должно лежать в пределах 0,08 – 0,10. Стандарты должны регулярно проверяться для гарантии точности измерений.
Интерпретация:
Стандарты мутности МакФарлайна представляют собой набор пробирок с увеличивающейся концентрацией сульфата бария. Мутность суспензии, образованной белым преципитатом сульфата бария, является величиной, соответствующей определённой концентрации бактериальной суспензии.
Мутность бактериальной суспензии измеряется в Международных единицах мутности (ME). Одна Международная единица мутности (1 ME) соответствует мутности взвеси коклюшных микробов с концентрацией 1,1 млрд. клеток в 1 мл.
10 Международных единиц мутности ориентировочно соответствуют следующим концентрациям клеток в 1 мл:
0,93*109 клеток/мл для микробов кишечной группы;
11*109 клеток/мл для микробов коклюшной группы;
1,7*109 клеток/мл для бруцеллезных микробов;
2,2*109 клеток/мл для холерного вибриона;
5*109 клеток/мл для туляремийных микробов.
В таблице приведено соответствие стандартов МакФарланда, числа ME и концентрации суспензии бактерий кишечной группы.
|
Стандарт мутности МакФарланда (ед.) |
0,5 |
1 |
2 |
3 |
4 |
|
Число Международных единиц мутности (ME) |
1,7 |
3,3 |
6,7 |
10 |
13,3 |
|
Соответствующая концентрация суспензии х108 КОЕ/мл |
1,5 |
3 |
6 |
9 |
12 |
Ограничения:
- Цветная среда может помешать интерпретации и дать некорректные результаты.
- Бактериальная суспензия, приготовленная из старых культур, может дать завышенное значение КОЕ/мл.
Условия хранения и срок годности:
Хранить при температуре 2-80С, оберегая от воздействия прямых солнечных лучей после каждого использования. Срок годности – 2 года.
From Wikipedia, the free encyclopedia
In microbiology, McFarland standards are used as a reference to adjust the turbidity of bacterial suspensions so that the number of bacteria will be within a given range to standardize microbial testing. An example of such testing is antibiotic susceptibility testing by measurement of minimum inhibitory concentration which is routinely used in medical microbiology and research. If a suspension used is too heavy or too dilute, an erroneous result (either falsely resistant or falsely susceptible) for any given antimicrobial agent could occur.
Original McFarland standards were made by mixing specified amounts of barium chloride and sulfuric acid together. Mixing the two compounds forms a barium sulfate precipitate, which causes turbidity in the solution. A 0.5 McFarland standard is prepared by mixing 0.05 mL of 1.175% barium chloride dihydrate (BaCl2•2H2O), with 9.95 mL of 1% sulfuric acid (H2SO4).[1]
Now there are McFarland standards prepared from suspensions of latex particles, which lengthens the shelf life and stability of the suspensions.
The standard can be compared visually to a suspension of bacteria in sterile saline or nutrient broth. If the bacterial suspension is too turbid, it can be diluted with more diluent. If the suspension is not turbid enough, more bacteria can be added.
McFarland nephelometer standards:{2}
| McFarland Standard No. | 0.5 | 1 | 2 | 3 | 4 |
| 1.0% barium chloride (ml) | 0.05 | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 |
| 1.0% sulfuric acid (ml) | 9.95 | 9.9 | 9.8 | 9.7 | 9.6 |
| Approx. cell density (1X10^8 CFU/mL) | 1.5 | 3.0 | 6.0 | 9.0 | 12.0 |
| % transmittance* | 74.3 | 55.6 | 35.6 | 26.4 | 21.5 |
| Absorbance* | 0.08 to 0.1 | 0.257 | 0.451 | 0.582 | 0.669 |
*at wavelength of 600 nm
McFarland latex standards from Hardy Diagnostics (2014-12-10), measured at the UCSF DeRisi Lab:
| McFarland Standard No. | 0.5 | 1 | 2 | 4 | 6 | 8 |
| Absorbance @600nm | 0.063 | 0.123 | 0.242 | 0.431 | 0.653 | 0.867 |
References[edit]
- ^ Cockerill, Franklin R.; et al. (2012). Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically; Approved Standard—Ninth Edition. CLSI. p. 12. ISBN 978-1-56238-784-6.
- THE NEPHELOMETER: AN INSTRUMENT FOR ESTIMATING THE NUMBER OF BACTERIA IN SUSPENSIONS USED FOR CALCULATING THE OPSONIC INDEX AND FOR VACCINES. JOSEPH McFARLAND, M.D. JAMA. 1907; XLIX(14):1176-1178.
Mcfarland Standards-http://www.dalynn.com/dyn/ck_assets/files/tech/TM53.pdf