Инструкция по стерилизации лабораторной посуды

Стерилизация лабораторной посуды.

Стерилизация
– обеспложивание; уничтожение в
каком-либо материале патогенных и
непатогенных микроорганизмов в
вегетативной и споровой формах.

Подготовка
посуды для стерилизации.
Лабораторная
посуда должна быть чисто вымытой и
простерилизованной. Для мытья используют
растворы мыла или химические моющие
средства. Новую посуду предварительно
кипятят в 1-2%-м растворе соляной кислоты,
во избежание последующего выщелачивания
стекла. Вымытую в проточной воде посуду
ополаскивают дистиллированной водой
и высушивают.

Бактериологические
пробирки. Конические, матровые колбы
закрывают ватно-марлевыми пробками,
состоящими из плотно скрученных валиков
ваты, покрытых слоем марли. Для
бактериологических пробирок также
разработаны металлические пробки в
виде наружных колпачков. Следует
учитывать, что стерилизация ватных
пробок при высокой температуре приводит
к выделению из ваты веществ, ингибирующих
рост некоторых чувствительных бактерий,
например бруцелл.

При монтаже
пипеток в верхний конец вставляют ватный
тампон. У пипеток Пастера должен быть
запаян капилляр. Каждую мерную пипетку
заворачивают длинной полоской бумаги
шириной 4-5 см, начиная с носика, винтообразно
по всей длине. Пипетки Пастера заворачивают
в бумагу по 10-20 штук, пробирки – по 15-20
штук. Все виды пипеток лучше хранить до
и после стерилизации в специальных
металлических пеналах. Пробки на колбах
дополнительно покрывают колпачками из
бумаги.

Чистые чашки
Петри в собранном виде перед стерилизацией
заворачивают в бумагу по 3-4 штуки. После
стерилизации бумага предохраняет
стерильную посуду от загрязнения
микрофлорой.

Посуду перед
стерилизацией размещают в сушильном
шкафу не слишком плотно, чтобы обеспечить
циркуляцию воздуха, и следят, чтобы
температура не превышала 180˚С, так как
при более высокой температуре бумага
и вата будут обугливаться. После окончания
стерилизации сушильный шкаф не открывают
до тех пор. Пока температура в нем не
снизится до 70-80˚С, поскольку резкий
перепад температур может привести к
разрушению стекла.

Если посуда
предназначена для стерилизации в ней
питательных сред автоклавированием
под давлением не менее 1 атм, то ее
предварительно не стерилизуют. При
стерилизации сред текучим паром или в
автоклаве под давлением не более 0,5 атм
необходимо использовать стерильную
посуду.

Стерилизация
сухим нагретым воздухом.
Метод применяют для стерилизации чистой
стеклянной посуды. Для этого используют
печь Пастера – специальный сушильный
шкаф с двойными стенками. Снаружи он
облицован теплонепроницаемым материалом.
В верхней его части находится термометр.
Между теплонепроницаемой обшивкой и
внутренним металлическим корпусом на
дне помещен автоматический
электронагревательный элемент. При
включении сушильного шкафа в электросеть
воздух внутри него нагревается. По
достижении заданной температуры отмечают
время начала стерилизации. Режим
стерилизации: при температуре 155-160˚С –
экспозиция 2 ч, при 165-170˚С – 1-1,5 ч, при
180˚С – 1 ч. По истечении времени стерилизации
нагревание прекращают.

Автоклавирование.
Это стерилизация паром под давлением
в сочетании с высокой температурой в
специальном аппарате – автоклаве. При
встрече насыщенного пара с более холодным
объектом пар конденсируется, превращаясь
в воду, в результате чего выделяется
большое количество тепла. Кроме того,
уменьшается объем пара, что способствует
его проникновению во внутренние части
стерилизуемого материала. Обязательное
условие – поступление действительно
насыщенного пара, чтобы его соприкосновение
с холодным предметом вело к немедленной
конденсации и нагреванию. Промышленность
выпускает вертикальные и горизонтальные
автоклавы.

Вертикальный
автоклав – это двустенный металлический
котел цилиндрической формы, закрываемый
герметично крышкой. Между стенками
через специальный кран с воронкой
заливают воду до определенного уровня.
Внутренняя стенка котла в верхней части
снабжена отверстиями, в нижней – краном,
через который при нагревании воды пар
вытесняет воздух из котла. Сверху на
автоклав надевают металлический защитный
каркас, причем между ним и самим автоклавом
должно быть свободное пространство.
Автоклав нагревают включением в
электросеть.

Автоклав
загружают стерилизуемым материалом,
закрывают крышку и кран, через который
заливали воду, нижний кран временно
отваляют открытым. Нагреваемая вода
между стенками автоклава кипит,
образующийся пар поднимается вверх и
через верхние отверстия внутренней
стенки проходит внутрь котла, толчками
вытесняя воздух через нижний открытый
кран. Когда воздух весь вытеснен, и пар
начинает выходить ровной струей, нижний
кран закрывают. В результате давление
пара внутри автоклава повышается.
Началом стерилизации считают момент,
когда давление достигает заданной
величины (по показателям манометра).
Нагрев регулируют на протяжении всей
стерилизации, поддерживая давление
пара на одном уровне. При чрезмерном
повышении давления внутри автоклава
предусмотрен предохранительный клапан,
через который избыток пара автоматически
выходит наружу.

При повышении
давления пара соответственно повышается
и температура в автоклаве.

Манометр
показывает давление пара без учета
окружающего атмосферного давления (760
мм рт. ст.). По истечении времени
стерилизации автоклав отключают. После
остывания при нулевом показании манометра
открывают кран для спуска пара.

Горизонтальный
автоклав отличается от вертикального
конструкцией, но принцип действия у
него такой же.

Дезинфекция и стерилизация лабораторной посуды проводится в отношении следующих изделий:

• предметные стекла;
• пробирки;
• бюксы;
• колбы;
• емкости;
• воронки;
• резиновые груши;
• чашки Петри;
• кюветы;
• пипетки;
• пластиковые и металлические инструменты и приспособления.

Правила и процесс обработки лабораторной посуды

Алгоритм обработки состоит из нескольких этапов:

• непосредственно сама дезинфекция;
• очистка перед стерилизацией;
• стерилизация.

Дезинфекция лабораторной посуды. Многоразовая посуда и инструменты подвергаются тщательной дезинфекции в подготовленных согласно инструкциям и рекомендациям производителя рабочих растворах в пластиковой или эмалированной емкости. Растворы должны обладать необходимой концентрацией по инструкции производителя. Дезинфекция проводится в защитных перчатках, очках, одежде, респираторе для предотвращения рисков ожогов при попадании дезинфицирующего средства на слизистые или открытые кожные пространства.

При дезинфекции изделия обрабатываются методом выдержки в растворах с погружением и нужной экспозицией. Для предметов с остатками крови применяются две емкости. В первой они отмываются от биологических загрязнений. Во второй замачиваются в дезинфицирующем растворе в течение одного часа. В дальнейшем изделия промывают под проточной водой, а затем подвергают воздействию дистиллированной воды.

После дезинфекции в лаборатории, которая применяется с помощью альдегидсодержащих и хлорсодержащих растворов, проводится предстерилизационная обработка изделий. Многоразовые лабораторные предметы подготавливаются таким образом к предстоящей стерилизации для максимально полного обеспечения микробиологической чистоты.

Важно отметить, что особую осторожность и тщательность надо проявлять при подготовке к стерилизации в отношении пипеток, бюреток, стаканов, пробирок и других предметов высокой хрупкости. После мытья многоразовых изделий их высушивают в сушильных шкафах при температуре 85°. Неустойчивые к высоким температурам предметы высушиваются при температуре в 40° или при комнатной температуре на специальных сушильных досках.

Важно! Неотъемлемая часть работы любой медицинской лаборатории — контроль над качеством проведенных обработок многоразовых изделий из стекла, пластмасс и т.д. Особенно тщательно такой контроль осуществляется в отношении посуды, контактирующей с кровью. Из каждой обрабатываемой партии контролю подлежат не менее 5 единиц. Их тестируют на содержание по поверхности биологических загрязнений и моющих средств. Положительная проба приводит к необходимости проведения повторной обработки. Отрицательная проба фиксируется в журнале предстерилизационной обработки (ПСО).

После двух предыдущих этапов следует процесс стерилизации. Ее простейшим, но весьма эффективным способом является кипячение устойчивых к высоким температурам и воде предметов из лаборатории в дистиллированной воде.

Также используется водяной пар в специальных аппаратах для обеззараживания стеклянных изделий и инструментов из термостойких полимеров, резины или латекса.  Стеклянная и металлическая лабораторная посуда может обрабатываться  в сухожаровых шкафах.

Химический способ обработки применяется к пластиковым изделиям или же металлической посуде. Как правило, она просто замачивается в растворах специальных дезинфицирующих средств по инструкции по применению от производителя.

Дезинфекция лабораторной посуды. Нормативно-правовая база

Правила и процессы дезинфекции лабораторной посуды в лаборатории регулируются СанПиН 2.1.3678-20. Соблюдение этого стандарта и данных в нем методических указаний позволяет предотвратить риски обсеменения лабораторной посуды многоразового применения патогенной микрофлорой. Здесь же можно найти указания на отечественные и зарубежные препараты и средства, применяемые с этой целью. Все инструкции для персонала лабораторий, осуществляющего дезинфекцию, предстерилизационную очистку и стерилизацию лабораторных предметов должны составляться на основе рекомендаций, данных в этом документе.

Стерилизация – процедура, направленная на уничтожение вредных
микроорганизмов в жидкости, продукте, материалы, на лабораторной посуде и
оборудовании. Недостаточно чистая посуда не позволяет качественно
исследовать необходимые материалы. Поэтому проведение стерилизации лабораторной посуды является необходимостью для качественных исследований.

Вся стеклянная посуда, прошедшая обработку, становится стерильной.
Стерилизация стеклянной лабораторной посуды проводится с использованием
различных методов и специально предназначенного для этого оборудования,
которое можно приобрести на выгодных условиях в интернет-магазине
«Промышленные экологические лаборатории».

Подготовка лабораторной посуды к стерилизации

Все емкости (колбы, пробирки, чашки) после проведения исследования
необходимо поместить в специальное ведро с крышкой или бикс, после чего
произвести обеззараживание с использованием автоклавирования на
протяжении не менее одного часа при температуре +125 градусов или 20
минут при температуре +135.

До обезжиривания освобождать обезжириваемые емкости категорически
запрещается. Чтобы свести к минимуму процессы мытья после обработки,
необходимо поместить посуду в горячую воду с добавлением 1% раствора
средства «Прогресс», и выдержать 60-120 минут. После этого емкости
обрабатываются щетками или ершами, промываются под проточной водой,
высушиваются в сушильных шкафах или при комнатной температуре.

Чтобы обезжирить пипетки, их обрабатывают следующим образом. Сначала
посуда тщательно промывается в воде, затем кипятится с добавлением
бикарбоната натрия (1% раствор) на протяжении 1 часа. Выполняется
промывка и сушка, после чего делается дезинфекция и стерилизация
лабораторной посуды в суховоздушных стерилизаторах (в пеналах или
завернутых видах).

Новая посуда также требует дополнительной обработки. Чтобы провести
качественно бактериологическое исследование, емкости промывают в моющих
0,5% растворах, после чего промывают под проточной водой и кипятят с
добавлением соляной кислоты не менее 20 минут. Завершающий этап –
ополаскивание.

Методы стерилизации лабораторной посуды

Способов обработки посуды существует несколько.

• Сухим теплом с использованием сушильного шкафа или суховоздушного
  термостата. При высоких температурах болезнетворные бактерии убиваются
  эффективно. Достаточно выдержать материалы 30-45 минут. Подходит для
  стерилизации пробирок, колб, чашек Петри и другого
• Влажным теплом – в аппарате Коха. Устройство напоминает пароварку, в
  котором происходит кипячении воды снизу и образование пара сверху.
  Подходит для обработки микробиологических сред, которые запрещено
  нагревать свыше ста градусов.
• Кипячение. Подвергаются резиновые изделия, шприцы, инструменты. В воду добавляется гидрокарбонат натрия (2%).
• Облучение с использованием установок «Амбилайф» или бактерицидных ламп.
  При этом стерилизуются не только предметы, но и поверхности, воздух.
• Пастеризация. Быстро уничтожает микроорганизмы и споры (менее чем за 10
  минут при температуре не выше 80 градусов). Используют для обработки
  лабораторных образцов и пищевых продуктов.
• Фильтрование. Применяют специальное оборудование со встроенными
  вакуумными насосами, с помощью которых стерилизуется жидкость и
  питательная среда.
• Химический способ. Такой вид стерилизации проходит с применением
  разнообразных соединений, веществ, тогда, когда невозможно использовать
  другой метод.

В каталоге представлен широкий выбор приборов и устройств, позволяющих
провести качественную стерилизацию лабораторной посуды любого вида. Вся
продукция от проверенных компаний-производителей.

Стерилизация — это уничтожение в материалах, продуктах, жидкостях, на поверхностях посуды и оборудования всех видов микроорганизмов и их спор. Мы уже рассказывали о таком способе стерилизации, как автоклавирование, упоминали другие способы стерилизации. Сегодня расскажем о самых популярных из них подробнее.

Стерилизация сухим теплом

Часто применяется в лабораторной практике. Для этого используются суховоздушные термостаты или сушильные шкафы. Высокие температуры гораздо эффективнее убивают живые клетки микроорганизмов, чем низкие температуры. Многие бактерии способны пережить обработку даже жидким кислородом при температуре -252 °С.

Обработка сухим теплом менее эффективна, чем влажным. Для полного уничтожения микроорганизмов в условиях влажного тепла нужно выдержать материал около 30 минут при +110-130 °С, а в суховоздушном шкафу — 45 минут при +180 °С.

Сухим теплом стерилизуют лабораторную стеклянную посуду (колбы, пипетки, пробирки, чашки Петри и пр.) при +160-200 °С. Чем ниже температура, тем дольше длится стерилизация: от 2 часов при +160 °С до 15 минут при +200 °С.

Стерилизация влажным теплом

Процедуру проводят в аппаратах Коха, похожих на бытовую пароварку. Вода кипит в нижнем отделении и пар стерилизует материалы, помещенные в верхнее отделение. Такой стерилизации обычно подвергают микробиологические среды, которые нельзя нагревать выше +100 °С.

Часто применяют дробную стерилизацию: выдерживают обрабатываемый раствор в течение часа при температуре около +70  °С, потом снижают температуру до оптимального для микроорганизмов уровня на сутки и опять нагревают, уничтожая все проросшие клетки. Так повторяют три-четыре раза.

Кипячение

Кипячением стерилизуют медицинские металлические инструменты, шприцы, резиновые перчатки, пинцеты, резиновые груши и т.п. Время процедуры отсчитывают от того момента, когда закипела вода.

Металлические инструменты кипятят в слабом (двухпроцентном) растворе гидрокарбоната  натрия, который не оказывает на металл коррозионного действия.

Облучение

Уничтожать микроорганизмы можно рентгеновским, альфа-, бета- и гамма, нейтронным, УФ-излучением. Обычно этот метод применяется на производствах. В лабораториях и медицинских учреждениях часто применяют бактерицидные лампы и установки типа «Амбилайф» для очистки воздуха и поверхностей в помещении.

Пастеризация

Применяется для обработки продуктов питания и некоторых лабораторных образцов. Она подразумевает уничтожение многих живых микроорганизмов, грибковых спор при температуре не более 80 °С, в течение 10 минут или менее. При этом вкусовые качества продуктов не изменяются. Кроме этого, сохраняются некоторые виды полезных бактерий.

Прокаливание в пламени

Этим методом стерилизуют микробиологические петли и иглы, концы пинцетов, сверла для пробок и т. п., иногда стеклянные принадлежности. Прокаливание производится в пламени газовой горелки. Более технологичный способ — прокаливание при температуре до +850 °С в электрическом стерилизаторе. В этом случае удается избежать загрязнения инструментов продуктами горения пламени.

Фильтрование

Для стерилизации питательных сред или жидкостей, разрушающихся при нагревании, используется фильтрование под вакуумом через специализированные фильтры. Фильтры подбирают таким образом, чтобы диаметр отверстий был меньше размера бактерий. Применяются фильтры фарфоровые, стеклянные, из глинозема, асбестовые, мембранные и др. Для того, чтобы оптимизировать процесс фильтрации, выпускаются специальные приборы со встроенным вакуумным насосом, например, система вакуумной фильтрации Lafil 400-LF 30.

Химическая стерилизация

Для химической дезинфекции применяются самые разнообразные вещества:

• этиловый и изопропиловый спирты;
• соединения хлора (гипохлорит натрия, хлорамины) и йода;
• соединения тяжелых металлов, например, ртути, серебра;
• производные фенола;
• микробоцидные (убивающие микробы) газы, к которым относят пары формальдегида, пропиолактона, оксид этилена.

Химическая стерилизация используется в лабораториях для оперативной обработки, а также в тех случаях, когда невозможно использовать другие методы.

Как стерилизовать  лабораторную посуду.

Для работы в бактериологической лабо­ратории используют Лабораторную посуду: Чашки Петри, пробирки различного размера, пастеровские пипетки, колбы, бактериологичес­кие петли, инструменты, предметные и покровные стекла, карандаш по стеклу (стеклограф), стерилизаторы, дистилляторы и т. п.

Посуду моют в специально оборудованных мойках. Новую посуду кипятят в 1 %-ном растворе пищевой соды или мыльной воде в течение 15-20 мин, промывают водой, помещают на несколько часов в слабый раствор соляной кислоты, затем тщательно ополаскивают дистиллиро­ванной водой. Посуду, бывшую в употреблении, выдерживают в течение 2 ч в смеси серной кислоты с дихроматом калия (100 частей кислоты, 50 частей дихромата калия на 1000 частей воды), затем моют ершами в горячей воде, кипятят в мыльной воде или в 1 %-ном растворе гидрокарбоната натрия и тщательно прополаскивают. Вымытую посуду помещают в сушильный шкаф. Предметные стекла после мойки протирают чистой полотняной салфеткой и хранят в склянках с при­тертой пробкой в смеси спирта и эфира или хорошо завернутыми в чистую бумагу.

Посуду для стерилизации готовят следующим способом. Пробирки, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками, завертывают по 10— 15 шт. в бумагу. На колбы надевают бумажные колпачки, перевязы­вают от попадания пыли.

В один конец градуированных пипеток вставляют ватный тампон, затем вращательным движением обматывают длинной тонкой полос­кой бумаги шириной 4-5 см. При этом концы пипеток должны быть тщательно завернуты бумагой.

В концы пастеровских пипеток вставляют ватные тампоны, а затем по несколько штук завертывают в бумагу или помещают в специаль­ные пеналы.

Чашки Петри завертывают по 3-4 шт. в бумагу и стерилизуют в сушильном шкафу или в автоклаве.

Колбы и пробирки, закрытые ватно-марлевыми пробками, мясо-пептонного бульона, агара и других сред помещают в стерилизующий аппарат.

Лабораторную посуду, питательные среды и другие материалы стерилизуют.

Стерилизация — Это полное уничтожение всех микроорганизмов (патогенных и сапрофитных) на стерилизуемом объекте.

Стерилизацию проводят различными методами: кипячением, паром под давлением (в автоклавах), текучим паром (в аппаратах Коха), сухим жаром (в печах Пастера), фильтрованием материала через бактериальные фильтры, прокаливанием на пламени горелки и др.

Стерилизацию кипячением производят в стерилизаторах. Кипяче­нием обычно стерилизуют инструменты в течение 30-40 мин. Однако при этом методе не всегда достигают полного уничтожения микробов. Споры некоторых микроорганизмов выдерживают кипячение бо­лее 3 ч.

Прокаливание на пламени применяют для стерилизации бакте­риологических петель, игл, скальпелей, ножниц, пинцетов и др.

Пастеризация — Это термическая обработка продуктов при темпе­ратуре ниже 100 °С с последующим быстрым охлаждением до 6-9 °С.

При пастеризации погибают неспоровые микроорганизмы, умень­шается общее количество микробов. Пастеризацию проводят при различных режимах: длительная при 63-65 «С в течение 20-30 мин; кратковременная при 75 °С от нескольких секунд до 5 мин; моменталь­ная при 90-93 °С без выдержки. Охлаждение стерилизуемого продукта необходимо для того, чтобы предотвратить прорастание в вегетатив­ные клетки спор, сохранивших жизнеспособность после однократного прогревания.

Стерилизацию и пастеризацию проводят в различных стерили­зующих аппаратах.