Что такое ПЦР
Полимеразная цепная реакция — высокоточный метод молекулярной биологии, который позволяет обнаружить в биоматериале ДНК и РНК патогенов. Отличается чувствительностью и специфичностью, а также скоростью получения результата.
В последнее время метод часто используется для диагностики новой коронавирусной инфекции COVID-19.
Полимеразную цепную реакцию изобрёл учёный-биохимик Кэри Муллис в 1983 году. Через 10 лет он получил за это Нобелевскую премию по химии.
Как работает ПЦР
В ходе исследования пробирку с биоматериалом помещают в особые условия, под воздействием которых молекулы нуклеиновой кислоты (двухнитевая ДНК, присутствующая в пробе или синтезированная из однонитевой РНК), кодирующие генетическую информацию определённого патогена, многократно копируются.
Если в исследуемом образце было хотя бы небольшое количество патогенных частиц, то через несколько часов их число увеличится до десятков и даже сотен миллионов. Это позволяет легко обнаружить возбудителя инфекции или генетическую «поломку» при очень низких рисках ложноотрицательного результата.
Молекула ДНК
Разновидности ПЦР
ПЦР — перспективное направление исследований. Учёные постоянно совершенствуют способы проведения реакции и изобретают новые методики, адаптируя ПЦР под разные цели.
В лабораторной диагностике применяются два основных метода — ПЦР в режиме реального времени и ПЦР с обратной транскрипцией.
С помощью ПЦР в режиме реального времени (количественной) можно не только выявить патогенные ДНК-молекулы, но и подсчитать количество их копий. Это позволяет рассчитать степень инфицирования, дозировку лекарств и длительность их приёма.
ПЦР с обратной транскрипцией применяется, если в качестве искомого генетического материала выступает не ДНК, а РНК вируса.
Дело в том, что у некоторых патогенов, например у вируса гепатита C, генетический материал представлен только РНК — однонитевой цепочкой нуклеотидов, в отличие от двухцепочечной ДНК-молекулы. Она тоже несёт в себе генетическую информацию, но не подходит для стандартной ПЦР.
Чтобы провести исследование, РНК-молекуле «восстанавливают» вторую нить с помощью особого фермента — обратной транскриптазы. Так РНК превращается в ДНК-молекулу, готовую к дальнейшему копированию с помощью стандартной ПЦР или ПЦР в режиме реального времени.
Как происходит ПЦР
Что нужно для ПЦР
Для проведения полимеразной цепной реакции используется специальный прибор — амплификатор. Он поддерживает необходимую для каждого этапа температуру и проводит циклы копирования ДНК — амплификацию.
Когда молекул становится достаточно для распознавания, оборудование анализирует их, а затем выдает качественный или количественный результат.
Пробирки с биоматериалом, подготовленным для ПЦР, в амплификаторе
Помимо амплификатора, для ПЦР необходимы определённые компоненты:
- Целевая ДНК — частица ДНК искомого патогена. Она состоит из уникальной последовательности нуклеотидов. Например, при ПЦР-анализе на герпес целью служит та часть ДНК, которая отличает вирус герпеса от других вирусов. Целевую ДНК также называют ДНК-матрицей.
Нити ДНК и РНК состоят из маленьких звеньев — нуклеотидов. Их последовательность образует генетический код, несущий наследственную информацию.
- Два праймера — короткие нити из нуклеотидов, которые подходят к искомым нитям ДНК, как детали пазла. На основе праймеров в ходе ПЦР создаются новые ДНК-молекулы. Если праймеры не подошли, значит, целевой ДНК в биоматериале нет.
- ДНК-полимераза — фермент, который достраивает нить ДНК в ходе ПЦР.
- Дезоксинуклеотидтрифосфаты (дНТФ) — смесь нуклеотидов, строительный материал для копий ДНК-молекул.
- Ионы магния (Mg2+) — поддерживают активность ДНК-полимеразы.
- Буферный раствор — смесь, которая создаёт оптимальные условия для биохимической реакции.
Этапы полимеразной цепной реакции
ПЦР состоит из трёх основных этапов.
Сначала пробу нагревают, и все ДНК-молекулы, которые есть в биоматериале, распадаются на две нити РНК. Этот процесс называется денатурацией.
Если генетический материал патогена — РНК, а не ДНК, то перед денатурацией проводят ПЦР с обратной транскрипцией. Этот метод позволяет превратить РНК в ДНК-молекулу.
Затем температуру снижают. Если в пробе есть целевая ДНК, праймеры присоединяются к концам двух её нитей — так происходит отжиг.
После отжига фермент ДНК-полимераза активируется и начинает достраивать вторую нить ДНК, начиная от праймера. Для восстановления цепи ДНК полимераза использует дНТФ. Заключительный этап называют элонгацией.
При проведении ПЦР выполняют более 30 циклов копирования (амплификации). В результате каждого цикла количество ДНК-цепей удваивается. Так, если на первом цикле было 2 цепи ДНК, на втором их будет уже 4, а на третьем — 8, и так далее.
Какие инфекции позволяет выявить ПЦР
Каждый патоген — бактерия, вирус или гриб — содержит уникальные РНК- или ДНК-молекулы.
По наличию этих молекул в биоматериале можно быстро и точно диагностировать заражение болезнетворными микроорганизмами. Но есть важное условие: у ПЦР-исследования должна быть цель — конкретный патоген, наличие которого нужно подтвердить или опровергнуть. Как правило, цель ПЦР определяет врач на основании осмотра, инструментального обследования и жалоб пациента.
Вирусные инфекции
У любых вирусов есть ДНК- или РНК-молекулы. ПЦР позволяет обнаружить их в организме, а ПЦР в реальном времени — ещё и подсчитать количество амплифицированных копий. Результат ПЦР может помочь врачу поставить диагноз, определить стадию болезни, подобрать дозировку лекарств и определить длительность курса лечения.
Бактериальные инфекции
Как и у вирусов, у всех бактерий есть ДНК-молекулы, которые можно выявить с помощью ПЦР.
Но не все бактерии, в отличие от вирусов, вредны. Например, условно-патогенные бактерии в небольших количествах приносят пользу организму. Однако, если по каким-либо причинам их становится слишком много, возникает бактериальный дисбаланс — дисбактериоз. Это состояние вредит здоровью.
Чаще всего условно-патогенные бактерии становятся причиной кожных, кишечных и гинекологических заболеваний. Для их диагностики используют качественную ПЦР и ПЦР в режиме реального времени — она позволяет выявить, превысило ли количество бактерий норму, и если да, то насколько сильно.
Опираясь на результат такого анализа, врач может рассчитать дозировку и длительность применения лекарств, оптимальную для восстановления нормальной микрофлоры.
Грибковые инфекции
В большинстве случаев для диагностики грибковых инфекций используется микроскопия: визуально обнаружить грибок не составляет труда, особенно при наличии выраженных симптомов.
Однако в некоторых случаях, например при кандидозе (молочнице), широко применяется ПЦР. Это связано с двумя основными факторами.
Во-первых, возбудитель кандидоза(кандида) — условно-патогенный грибок. Она становится болезнетворной, только если её слишком много.
ПЦР в режиме реального времени позволяет уточнить, насколько сильно «разрослась» кандида, и подобрать оптимальную дозировку препарата, чтобы сократить её количество.
Во-вторых, слизистые оболочки урогенитального тракта, влагалища и рта густо населены различными микроорганизмами. ПЦР в таком случае — более точный метод диагностики благодаря своей прицельности.
Где ещё применяют ПЦР
Поскольку генетический код есть у всех живых существ, ПЦР-метод применяется везде, где может понадобиться многократное увеличение числа ДНК- и РНК-молекул. Например, для получения пригодного для дальнейших исследований генетического материала с места преступления или поиска конкретных генетических мутаций.
ПЦР в установлении родства
Если биоматериала недостаточно для определения родства, перед основным анализом может потребоваться амплификация молекул ДНК. Большое количество биоматериала позволит провести более точное исследование. Например, установить пол, вид или родство как живых, так и мёртвых существ.
ПЦР в диагностике предрасположенностей
С помощью ПЦР можно выявить определённые гены, которые отвечают за предрасположенность человека к различным состояниям (например, к избыточному весу) или болезням.
Подобные исследования назначаются, если пациенту нужен план профилактики развития заболеваний.
ПЦР в диагностике генетических мутаций
Ещё полимеразная цепная реакция позволяет обнаруживать в генах мутации, которые могут влиять на эффективность лечения различных заболеваний. Например, в случае бронхиальной астмы или сердечной недостаточности результат исследования на ген бета-2-адренорецептора ADRB2 может помочь врачу подобрать лекарства.
Кроме того, некоторые мутации в генах могут служить маркерами онкологических заболеваний. Их обнаружение позволяет специалистам подобрать наиболее эффективную терапию и спрогнозировать дальнейшее развитие патологий.
ПЦР в судебно-медицинской экспертизе и криминалистике
Более узкая сфера для применения генетических ПЦР-тестов — расследования.
Почти 99,9% ДНК разных людей идентичны. Однако оставшаяся 0,1% — это уникальная часть генетического кода, которая отличает людей друг от друга. Выделение и сравнение этих уникальных частей позволяет идентифицировать преступника или жертву.
ПЦР может применяться в тех случаях, когда генетического материала слишком мало для точного исследования. Например, если были найдены разложившиеся останки тела или оно сильно обгорело, и опознать его невозможно.
В случае поиска преступника генетический материал может помочь доказать вину подозреваемого. ПЦР позволяет выделить ДНК из любых биологических «следов», которые злоумышленник мог оставить. Подойдут кровь, слюна, моча, волосы, семенная жидкость, частицы кожи под ногтями жертвы. Выделить ДНК можно даже из отпечатка пальца.
Отпечаток пальца содержит около 10 нанограмм ДНК. Для исследования достаточно 0,1 нанограмма.
ПЦР в ветеринарии
Ветеринары используют ПЦР так же, как и врачи: для диагностики у животных различных инфекционных заболеваний, а также оценки эффективности лечения.
У диких и бродячих животных ПЦР помогает выявить патогены, которые передаются людям и вызывают опасные для жизни заболевания. Например, бешенство, бубонную чуму, некоторые виды гриппа, оспу и другие.
ПЦР в растениеводстве
Для выявления фитопатологий — заболеваний растений — полимеразная цепная реакция тоже применяется. Она позволяет обнаружить вирусы, бактерии и грибы, которые могут привести к частичной или полной гибели урожая.
Проблемой применения ПЦР в растениеводстве служит только стоимость оборудования, которое не все хозяйства могут себе позволить, а также высокая чувствительность метода. Дело в том, что если образец загрязнён незначительным количеством патогена, результат анализа будет положительным.
Эта особенность требует более тщательной подготовки растительного материала к исследованию, а также стерильных условий в лаборатории и дополнительных проверочных тестов.
ПЦР в контроле потребительских продуктов
ПЦР может использоваться для контроля применения генно-модифицированных организмов (ГМО), которые часто присутствуют в продуктах питания и различных кормах.
Генно-модифицированные организмы создаются с помощью генной инженерии — «редактирования» исходного генетического кода организма и «прививания» ему полезных свойств. Это позволяет приспособить растения к неблагоприятному климату, вредителям или химикатам, а также заставить их быстрее расти или приносить больше плодов.
ПЦР позволяет многократно копировать удачную ДНК-молекулу, выявлять ГМО, а также создавать миллионы образцов для дальнейшего применения или для новых экспериментов и разработок.
Преимущества ПЦР
Полимеразная цепная реакция считается одним из самых эффективных способов выявить инфицирование. Метод точен — он позволяет обнаружить искомый патоген, даже если его концентрация в пробе крайне мала.
Кроме того, результат ПЦР не зависит от иммунной реакции организма, культивационных особенностей патогена или стадии инфицирования.
Точность
Точность ПЦР складывается из двух критериев — чувствительности и специфичности.
Чем ниже вероятность ложноотрицательного результата, тем выше чувствительность метода.
Чувствительность ПЦР составляет 90–100% — с такой вероятностью анализ выявит патоген, если он действительно есть в пробе.
По сравнению с полимеразной цепной реакцией, другие методы менее чувствительны. Так, например, чувствительность иммуноферментного анализа составляет 50–70%, а культурального исследования — 60–80%.
Чем ниже вероятность ложноположительного результата, тем выше специфичность метода.
Специфичность ПЦР достигает 100%. Если в биоматериале нет подходящей РНК или ДНК, реакция не произойдёт.
Высокой специфичностью обладает и культуральный метод, однако он менее чувствителен, и это снижает его общую точность.
Иммуноферментный анализ, в отличие от ПЦР и культурального метода, выявляет не патоген, а антитела — особые белки, которые иммунная система вырабатывает для борьбы с ним.
После болезни антитела могут давать перекрёстную реакцию с другими антителами. Например, при анализе на болезнь Лайма положительный результат могут дать антитела к возбудителю инфекционного мононуклеоза и другим герпес-вирусам. В обоих случаях результат может быть ложным, так как фактически пациент не заражён искомым патогеном и/или заражён чем-то другим.
Таким образом, высокая чувствительность и специфичность полимеразной цепной реакции делают её одним из самых точных методов лабораторной диагностики.
Скорость
В большинстве случаев результат ПЦР можно получить через один день.
Срок готовности посева (культуральный метод) — в среднем от двух-трёх дней.
Готовность результата иммуноферментного анализа — в среднем около двух дней.
Независимость от особенностей патогена
По сравнению с другими методами лабораторной диагностики, на успех ПЦР не влияют некоторые характеристики патогенов.
Так, например, суть культурального метода (посева) заключается в выращивании бактерий и грибов на комфортной для них питательной среде.
Если в пробе были микроорганизмы, со временем их численность увеличится и станет заметна даже без микроскопа.
Однако некоторые бактерии культивировать сложно. Например, боррелии и бледная трепонема настолько требовательны к условиям питательной среды и посева, что этот метод невозможно применять в лабораторной диагностике болезни Лайма и сифилиса.
Риккетсии и хламидии — внутриклеточные паразиты, они в целом не выращиваются в лабораторных условиях, а шигеллы и сальмонеллы не всегда активны и в определённых фазах не размножаются.
На эффективность ПЦР особенности выращивания грибов и бактерий не влияют. Более того, с помощью ПЦР можно проводить исследование ещё и на вирусы.
Колонии бактерий, выращенные культуральным методом
Независимость от иммунной реакции и наличия симптомов
Серологические исследования опираются на наличие у больного антител к патогенам. Если заражение произошло недавно, инфекция протекает в скрытой форме или у пациента есть иммунные нарушения, результат серологического исследования может быть ложным.
Так, например, первые антитела к возбудителю гепатита B появляются только через 1–3 месяца. Соответственно, ранняя диагностика болезни с помощью анализа на антитела будет неэффективна.
Кроме того, иммунная система некоторых пациентов вообще не вырабатывает антитела при подтверждённой ПЦР инфекции. Такое бывает, например, при клещевом энцефалите.
ПЦР, напротив, не зависит от иммунной реакции, и с её помощью можно диагностировать заболевание в самом начале — до появления антител и первых симптомов.
Около 50% серологических исследований на гепатит B в инкубационном и начальном периоде дают ложноотрицательный результат при положительной ПЦР.
Как и при многих других инфекционных заболеваниях, при гепатите ранняя диагностика играет важную роль. Она позволяет сразу начать лечение, минимизировать последствия болезни и предотвратить дальнейшее распространение возбудителя. В таких случаях ПЦР — предпочтительный метод исследования.
Недостатки ПЦР
Точечное применение
ПЦР должна иметь одну определённую цель — патоген, генетический материал которого будет копироваться.
Если у пациента микст-инфекция (заражение сразу несколькими патогенами), ПЦР-исследование обнаружит только тот патоген, на который ориентирован анализ. Обнаружить дополнительные вирусы или бактерии заодно с целевым инфекционным агентом не получится.
Чувствительность оборудования
Оборудование для ПЦР очень чувствительное и требует стерильности как в процедурном кабинете, так и в самой лаборатории.
До 70% ошибочных результатов ПЦР связаны с нарушением правил подготовки проб.
Если проба случайно загрязнится в процессе взятия, транспортировки или добавления реагентов, результат исследования может быть ложным.
Как подготовиться к сдаче анализа методом ПЦР
Основная задача при взятии биоматериала для ПЦР — не загрязнить его. Для этого нужно строго соблюдать правила подготовки.
Подготовка к ПЦР-анализу крови
- Кровь следует сдавать натощак, с 8 до 11 часов утра. В течение дня показатели крови могут существенно меняться, результат утреннего анализа — самый достоверный.
- За 24 часа до теста следует исключить алкоголь и воздержаться от интенсивных физических нагрузок.
- За 8 часов до взятия крови не следует есть, а также пить соки, молоко или другие напитки. Можно пить негазированную воду. Накануне исследования лучше поужинать лёгкой, нежирной пищей.
- За 1–2 часа до анализа желательно не курить, избегать стресса и физического напряжения (бег, быстрый подъём по лестнице).
- За 15 минут до взятия крови желательно немного отдохнуть: посидеть в лабораторном отделении, отдышаться, успокоиться.
- За 1–2 дня до исследования исключить из рациона продукты с высоким содержанием жиров. За 2 дня до сдачи крови на вирусные гепатиты исключить из рациона цитрусовые, оранжевые фрукты и овощи.
Правила взятия крови у детей:
- младенцы до 1 года
- дети до 7 лет
Для контроля показателей в динамике следует сдавать анализ в одинаковых условиях: в той же лаборатории, в то же время суток.
Лекарства и медицинские процедуры могут повлиять на результат анализа.
Не следует сдавать кровь сразу после физиотерапевтических процедур, инструментального обследования, рентгенологического или ультразвукового исследования, массажа.
Лучше всего выполнять исследование крови до начала приёма лекарственных препаратов или через 10–14 дней после их отмены. О принимаемых лекарствах следует предупредить медсестру, а также врача, который выполняет диагностику или назначает лечение.
Исследования для оценки эффективности лечения, как правило, проводят через 1–2 недели после последнего приёма препарата.
Подготовка к ПЦР-анализу мочи
За 24 часа до анализа следует исключить из рациона продукты, меняющие цвет и химический состав мочи: алкогольные напитки, «красящие» овощи — свёклу и морковь, а также специи и соль. По согласованию с врачом лучше отказаться от приёма мочегонных препаратов.
Перед взятием биоматериала необходимо тщательно вымыть наружные половые органы.
Женщинам рекомендуется обработать половые губы ватными тампонами: сначала — смоченными в тёплой воде с мылом, затем — смоченными в чистой воде.
Движения тампона должны быть направлены от лобка к заднему проходу. Лишнюю влагу удалить чистой салфеткой.
Мужчинам следует тщательно вымыть отверстие мочеиспускательного канала тёплой водой с мылом, оттянув кожную складку, промыть водой и промокнуть чистой салфеткой.
Биоматериал следует собрать в одноразовый стерильный контейнер. Его можно бесплатно получить в любом лабораторном отделении Гемотест.
Инструкция по использованию контейнера
- Открутите крышку контейнера и положите её, не касаясь внутренней части крышки.
- Соберите первую порцию мочи в контейнер.
- Если мочу на анализ берут у ребёнка, можно использовать мочеприёмник.
- Закройте контейнер крышкой и плотно закрутите её.
- Доставьте контейнер в лабораторное отделение в течение 2 часов после взятия биоматериала.
Подготовка к ПЦР-анализу кала
Кал следует сдавать до приёма антибиотиков или не ранее, чем через 12 часов после приёма препарата.
За 72 часа до исследования откажитесь от использования ректальных свечей и масел, слабительных средств и клизм, а также прекратите приём препаратов, оказывающих влияние на работу кишечника и окраску кала.
Соберите образец кала после естественного опорожнения кишечника без применения клизм или слабительных средств.
Позаботьтесь о том, чтобы в биоматериал не попали посторонние примеси: вода, моча, выделения половых органов, дезинфицирующие средства и химические вещества, содержащиеся в подгузниках:
- перед дефекацией вымойте и высушите промежность;
- соберите кал с чистой и не впитывающей влагу поверхности: это может быть чистый пакет из полиэтилена, клеёнка, чистое судно или горшок.
Собирать кал из унитаза, пелёнок или подгузников — нельзя!
Поместите 1–2 чайные ложки биоматериала в герметичный контейнер. Если нужно выполнить несколько анализов, подготовьте для каждого исследования отдельную порцию биоматериала в отдельном контейнере.
Доставьте контейнер в лабораторное отделение в течение 2 часов после сбора. Чтобы сохранить температуру контейнера, можно поместить его в термос с кубиком льда или в пакет с хладоэлементами.
Если отслеживаете показатели в динамике, сдавайте каждый анализ при одинаковых условиях: в том же лабораторном отделении, тем же методом.
Исследования для оценки эффективности лечения, как правило, проводят через 2–4 недели после приёма антибактериальных препаратов.
Подготовка к ПЦР-анализу слюны
За 24 часа до исследования по предварительному согласованию с лечащим врачом следует отказаться от терапии полости рта какими-либо лекарственными препаратами.
За 3 часа до исследования рекомендуется отказаться от курения, употребления пищи и гигиены полости рта (полоскание, чистка зубов, применение освежителей для рта, употребление леденцов, жевательной резинки).
Подготовка к ПЦР-анализу мокроты
- За 2 недели до исследования по согласованию с лечащим врачом следует прекратить приём противомикробных препаратов и иммуномодуляторов.
- Мокроту следует собирать утром, сразу после пробуждения. Предварительно нужно почистить зубы и прополоскать рот, нельзя есть до взятия биоматериала.
- Важно собирать не слюну или носоглоточную слизь, а мокроту. Сделайте несколько глубоких вдохов, чтобы вызвать «мокрый» кашель. Необходимо откашлять содержимое глубоких дыхательных путей.
- Сплюньте мокроту в заранее подготовленный стерильный контейнер с плотно закрывающейся крышкой. Минимальный объём мокроты — 1 мл.
- Доставьте контейнер в лабораторное отделение в день взятия биоматериала.
Подготовка к соскобу из зева
За 24 часа до исследования по предварительному согласованию с лечащим врачом следует отказаться от терапии полости рта какими-либо лекарственными препаратами.
За 3 часа до исследования рекомендуется отказаться от курения, употребления пищи и гигиены полости рта (полоскание, чистка зубов, применение освежителей для рта, употребление леденцов, жевательной резинки).
Подготовка к соскобу из влагалища или урогенитального тракта
За 30 дней до исследования следует прекратить применение антибиотиков по согласованию с лечащим врачом.
За 24 часа до исследования не следует проводить спринцевание, внутривагинальную терапию (свечи, тампоны), не использовать антисептические средства (в том числе мирамистин), исключить половой контакт.
В день исследования запрещается проводить туалет половых органов.
Женщинам рекомендуется сдавать анализ до менструации или через 5 дней после её окончания.
Мужчинам рекомендуется не мочиться в течение 3 часов (15–20 минут в случае обильных уретральных выделений) до взятия материала.
Удаление
родинок, папиллом
Выгода до 50%
Быстро!
Безболезненно!
Без реабилитации!
СКИДКА 25%
Диагностика у гинеколога*
Все за один день — всего за 8 200 руб.
*подробности у администратора
Скидка до 25%
Диагностика у уролога
Чек-апп от 5 350 руб.
Обследование за один день
Скидка 50%
на прием ЛОР-врача
СКИДКА 50%
прием врача-терапевта
Интимное омоложение
Скидка 20%*
Эффект от первой процедуры!
Сохрани чувствительность!
Совершенно не больно
Лабораторное проведение ПЦР-анализа: основные этапы
Анализ ПЦР (полимеразная цепная реакция) – метод диагностики высокой точности, который позволяет выявлять разные виды инфекции. Для этого в лабораторных условиях проводится исследование генетического материала (слюны, мокроты, крови, выделений из половых органов и других биологических материалов).
На первоначальном этапе проведения ПЦР-анализа производится забор материала для исследования. При этом должны быть соблюдены правила: обеспечение полной стерильности, использование исключительно одноразовых материалов.
После забора биоматериал при помощи щеточки помещается в контейнер с физраствором. Лабораторное исследование взятых проб должно быть выполнено как можно быстрее после забора.
ПЦР-анализ ДНК в лаборатории включает три этапа:
- выделение;
- ампликация фрагментов;
- детекция продуктов ампликации.
Когда врач выполнил забор биоматериала у пациента и провел его специальную обработку, двойная спираль ДНК расщепляется на отдельные нити. При добавлении специальной жидкости в биоматериал, растворяются органические вещества, которые мешают «чистоте» реакции. Как следствие, после устранения липидов, аминокислот, пептидов, углеводов, белков, полисахаридов, образуются ДНК либо РНК.
Время, которое требуется на выделение ДНК, зависит от вида возбудителя инфекции, а также биоматериала, который используется для проведения анализа. Так, к примеру, если будет исследоваться кровь, подготовительный этап занимает до двух часов.
Для ампликации ДНК применяются специальные матрицы. Чтобы провести данный этап, вполне достаточно небольшого кусочка ДНК, который характерный только для конкретной инфекции.
Ампликация ДНК – это многократное увеличение количества копий ДНК, которые характерны только для определенного организма. Всю цепь не обязательно достраивать, чтобы увидеть, что является возбудителем инфекции. Требуется только участок, который является характерным для конкретной бактерии.
Чтобы провести ПЦР-диагностику, используется специальное программируемое оборудование, которое автоматически меняет температуру. При проведении амплификации задается программа, которая соответствует определенной инфекции. Занимает данный этап приблизительно 2-3 часа.
Детекция продуктов асплификации подразумевает разделение смеси продуктов амплификации, которая была получена. Для этого добавляются специальные растворы, чтобы фрагменты ДНК отражались светящимися полосами оранжево-красного цвета. Это свечение показывает наличие ДНК вирусов, бактерий и микроорганизмом в биоматериале пациента, точно определяя их конкретный вид.
читать далее
свернуть
АНАЛИЗЫ, КОТОРЫЕ МОЖНО СДАТЬ У НАС:
-
Covid-19. Анализы на антитела к коронавирусу
-
Анализы на инфекции
-
Анализы Подготовка и расшифровка
-
Анализ кала
-
Анализ крови на RW
-
Анализ крови на сахар
-
Анализ крови на хламидиоз
-
Анализ мочи
-
Анализ мочи по Нечипоренко
-
Анализ мочи при беременности
-
Анализ на АФП
-
Анализ на ВИЧ
-
Анализ на гемоглобин
-
Анализ на гормон ЛГ
-
Анализ на гормоны
-
Анализ на дисбактериоз
-
Анализ на кортизол
-
Анализ на краснуху
-
Анализ на онкомаркеры
-
Анализ на остеопороз
-
Анализ на паразитов
-
Анализ на паракоклюш
-
Анализ на прогестерон
-
Анализ на пролактин
-
Анализ на РАРР-А
-
Анализ на РЭА
-
Анализ на Са-125
-
Анализ на Са-19-9
-
Анализ на совместимость
-
Анализ на тестостерон
-
Анализ на ТТГ
-
Анализ на ФСГ
-
Анализ на эстриол
-
Анализ соскоба на наличие яиц остриц
-
Анализ спермы (Спермограмма)
-
Анализы на грибок
-
Биохимический анализ крови
-
Гемостазиограмма, Коагулограмма
-
ДНК-диагностика
-
Достоинства и недостатки ПЦР-диагностики
-
Метод ПЦР в гинекологии
-
Ошибки в ПЦР-диагностике
-
ПЦР и ИФА-диагностика
-
Современная ДНК-диагностика
-
Строение ДНК
- Этапы полимеразной цепной реакции (ПЦР)
-
-
Общий анализ крови (Клинический анализ крови)
-
Общий мазок
-
Определение беременности. Анализ крови на беременность
-
-
Анализы при бесплодии
-
Анализы при дисфункции яичников
-
Анализы при кистах и опухолях яичников
-
Анализы при нарушениях веса
-
Анализы при подборе гормональной контрацепции
-
Анализы при подготовке к беременности
-
Молекулярно-генетические исследования
-
Обследование молочных желез
-
Обследование при гирсутизме и проблемах с волосами
-
Обследование при задержке менструации
-
Обследование при зуде гениталий
-
Обследование при менопаузе
-
Обследование при невынашивании беременности
-
Обследование при эндометриозе
-
Обследование щитовидной железы
-
Обследования при определении овуляции
-
Полное обследование организма
-
Эрозия шейки матки
Остались вопросы? Мы перезвоним Вам в течении 10 минут
Наши цены
-
Covid-19 метод ПЦР
Наименование услуги Цена, ₽ ПЦР-тест на Covid-19, мазок (ПЦР-тест на коронавирус SARS-CoV-2) 1 990 Экпресс тест ПЦР на Covid-19, мазок (Экспресс-тест, ПЦР, РНК вируса SARS-CoV-2) 3 890 Забор биоматериала 390 -
Covid-19 определение антител IgG
Наименование услуги Цена, ₽ Антитела количественные к спайковому (S) белку SARS-CoV-2, IgG (Anti-SARS-CoV-2, spike (S) protein, IgG, quantitative)
1 490 Антитела качественные к спайковому (S) белку SARS-CoV-2, IgG;. (Аnti-SARS-CoV-2 S (spike) protein antibody, IgG, qualitative). С целью оценить иммунный статус после COVID-19
1 090 Антитела качественные поствакцинальные (ЭпиВакКорона, Вектор) к SARS-CoV-2 (N-, S-белки), SARS-CoV-2-IgG-Вектор, (Post-vaccination (EpiVacCorona Vector) SARS-CoV-2 (N-, S-proteins) antibodies, IgG, qualitative)
2 290 Взятие крови из вены 390 Для проведения исследования в клиниках Москвы необходимо предъявить СНИЛС и документ удостоверяющий личность -
Аллергологические исследования
Наименование услуги Цена, ₽ Панель аллергенов Пищевые №22 (Горбуша, кита, лещ, лосось, речной окунь, сом, скумбрия, навага) 1 490 Панель аллергенов Пищевые №23 (Дорадо, икра красная, лангуст, осьминог, раки, речная форель, рыба сиг, устрицы) 1 490 Панель аллергенов Пищевые № 2 (Арахис, Фундук, Морковь, Треска, Картофель, Кунжут, Миндаль, Краб, Грецкий орех, Сельдерей
3 100 Панель аллергенов № 2 респираторная (RIDA-screen) , IgE (до 5р.д.) 5 490 Респираторная скрининговая панель из смесей аллергенов 7 650 Респираторная панель (Respiratory panel PROTIA Allerqy-Q). Мультиплексный диагностический набор для диагностики аллергии 8 740 Аллерген к эпителиям кошки, IgE (Cat Dander-Epithelium, E1, IgE)
760 Аллерген к перхоти кошки (e1), IgE, ImmunoCAP (Cat dander (e1), IgE) 890 Аллерген к эпителиям собаки (Е2), аллерген-специфические IgG
760 Аллерген к перхоти собаки (е5), IgE, ImmunoCAP (Dog dander (e5), IgE) 890 Аллерген домашняя пыль, Greer (h1), IgE, ImmunoCAP (House dust allergen, Greer (h1), IgE). Используют с целью скрининга на наличие сенсибилизации к распространенным аллергенам домашней пыли. 1 050 Аллерген домашняя пыль Hollister–Stier Lab. (h2), IgE, ImmunoCAP (House dust allergen Hollister –Stier Lab. (h2), IgE). Используют для выявления сенсибилизации к аллергенам домашней пыли.
1 050 Панель наиболее распространённых пищевых аллергенов для скринингового обследования с целью выявления значимых аллергенов при подозрении на пищевую аллергию. Результат выдаётся с указанием концентрации и класса IgE по каждому аллергену в отдельности. Взятие крови из вены 390 -
Аутоимунные заболевания (антитела)
Наименование услуги Цена ,₽ Антитела к кардиолипину (IgG, IgM, IgA) (сумм.) кол. 1 450 Антитела к тиреопероксидазе (АТ- ТПО) 610 Антитела к рецепторам (АТ- ТТГ) 1 790 Антитела к антигенам миокарда 2 790 Антинуклеарные антитела/ ANA-скрининг (антигены ds-DNA, гистоны, рибосомальный Р-протеин
nRNP/Sm, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, Jo-1, центромеры
1 110 Антитела к односпиральной (денатурированной) ДНК (a-ssDNA) 990 Антитела к двухспиральной (нативной) ДНК (a-dsDNA) 990 Антитела к циклическому цитруллиновому пептиду (ССР) 1 590 Антитела к В- 2 гликопротеину IgA/М/G (сумм.) кол. 1 100 Антитела к цитоплазме нейтрофилов, NSCA класса IgG 960 Антитела к цитоплазме нейтрофилов, NSCA класса IgА
1 050 ANCA- профиль (протеиназа 3, МПО, эластаза, катепсин G, BP, лактоферин) IgG полуколич. 2 790 Антитела к ХГЧ IgM 2 200 Антитела к ХГЧ IgG 2 200 Антитела к фосфатидилсерину IgG кол. 1 250 Антитела к фосфатидилсерину IgМ кол. 1 250 Антитела к фосфолипидам IgG кол. 1 250 Антитела к фосфолипидам IgМ кол. 1 250 Антиспермальные антитела 1 320 Антиовариальные антитела 1 290 Антитела IgA к тканевой трансглутаминазе 650 Антитела IgG к тканевой трансглутаминазе 650 Антитела IgA к глиадину 965 Антитела IgG к глиадину 965 Антитела к Saccharomyces cerevisiae (ASCA), IgA 1 630 -
Бактериальные инфекции (кровь)
Наименование услуги Цена, ₽ Урогенитальные инфекции
Хламидии трахоматис IgA 755 Хламидии трахоматис IgG 755 Хламидии трахоматис IgM 755 Микоплазма хоминис IgG 555 Микоплазма хоминис IgА 555 Микоплазма хоминис IgМ 960 Кандидоз IgG 910 Уреаплазма IgG 555 Уреаплазма IgА 555 Гарднереллез Трихомониаз Лактобациллы Другие бактериальные инфекции
Хеликобактер пилори IgG 910 Хеликобактер пилори IgA 910 Сальмонелла (РПГА с диагностикумом, anti-Salmonella A,B,C1,C2,D,E )
770 Антитела суммарные к туберкуллезу 960 -
Бактериологические исследования (посев)
Наименование услуги Цена, ₽ Посев отделяемого половых органов на микрофлору, определение чувствительности к антимикробным препаратам и бактериофагам
1 560 Посев на микрофлору из ЛОР органов с определением чувствительности к антибиотикам, бактериофагам и антимикотикам 1 490 Посев мокроты на микрофлору с определением чувствительности к антибиотикам 2 200 Посев мочи с определением чувствительности к антибиотику 1 380 Посев секрета простаты с определением чувствительности к антибиотику 1 380 Посев спермы с определением чувствительности к антибиотику 1 380 Посев на Mycoplasma hominis с чувствительностью к антибиотику 1 110 Посев на Ureaplasma urealyticum с чувствительностью к антибиотику 1 110 Посев на дифтерию 860 Посев на дрожжеподобные грибы (Candida) с определением чувствительности к антибиотику 850 Посев на листерии с определением чувствительности к антибиотикам 1 210 Посев на трихомонаду с чувствительностью к антибиотику 1 500 Посев на гонорею с чувствительностью к антибиотику 1 500 Взятие мазка/соскоба 390 -
Биохимические исследования крови
Наименование услуги Цена,₽ Аланиновая трансаминаза (АЛТ) 290 Аспарагиновая трансаминаза (АСТ) 290 Альфа амилаза 290 Амилаза панкреатическая 410 Альбумин 350 Аполипопротеин А1 630 Аполипопротеин В 630 Антистрептолизин –О (АСЛ-О) 550 Ангеотензинпревращающий фермент (АПФ) 2 590 Антитела к инсулину 975 Антитела к бета- клеткам поджелудочной железы 1 330 Антитела к глутаматдекарбоксилазе (АТ к GAD) 1 330 Гамма-ГТ (ГГТ) 290 Глюкозотолерантный тест 1 130 Билирубин общий 290 Билирубин прямой 290 Билирубин непрямой 410 Белковые фракции 690 Витамин В-12 925 Витамин В-12 активный (холотранскобаламин) 2 050 Глюкоза 290 Гликированный гемоглобин 750 Гомоцистеин 1 800 Д (ИФА) 1 590 Индекс атерогенности 350 Железо 300 КФК (креатинфосфокиназа) 410 Кислая фосфатаза 290 ЛДГ (лактатдегидрогеназа) 290 Латентная железосвязывающая способность сыворотки 330 Лактат 730 Липаза 455 Липопротеин (а) 970 ЛПВП 290 ЛПНП 290 ЛПОНП 330 Миоглобин 1 090 Креатинин 290 Креатининкиназа МВ (КФК- МВ) 520 Кальций общий 285 Кальций ионизированный 480 Калий/Натрий/Хлор 420 Калий 290 Магний 340 Мочевина 290 Мочевая кислота 290 Медь 410 Натрий 290 Общий белок 290 ОЖСС 300 Риск атеросклероза (скрининг)- триглицериды, холестирин общий, ЛПВП, ЛПНП, коэффициент атерогенности 880 Ревматоидный фактор 550 Уровень сахара в крови 280 Определение уровня сахара в крови (с нагрузкой) 1 130 Трансферрин 650 Тропонин I 1 190 Триглицериды 290 Ферритин 685 Фруктозамин 800 Фосфор 300 Фолиевая кислота 999 Хлор 290 Холестерин общий 290 Холинэстераза 350 Цинк 300 Церулоплазмин 640 Щелочная фосфатаза 290 С- реактивный белок 550 С- реактивный белок ультрачувствительный 610 Эозинофильный катионный белок (ЕСП) 910 Эритропоэтин 1 350 в- Cross laps 1235 -
Вирусные инфекции крови
Наименование услуги Цена, ₽ Краснуха IgG 930 Краснуха IgM 930 Авидность антител к вирусу краснухи 1 050 Корь IgG 865 Коклюш (IgM) 970 Коклюш (IgA) 970 Коклюш (Anti-B pertussis IgG) 970 Вирусный паротит 765 Аденовирус IgG 1050 Аденовирус IgA 1 050 Респираторно-синцитиальный вирус IgG 950 Паракоклюш 520 Токсокар IgG кач 560 Тканевая трансглутаминаза IgA 720 Тканевая трансглутаминаза IgG 720 -
Гемостазиология (кровь)
Наименование услуги Цена, ₽ АЧТВ (Активированное частичное тромбопластиновое время) 350 Антитромбин III 490 Анализ крови на свертываемость 430 Анализ крови на свертываемость+ длит.кровотечения 790 Волчаночный антикоагулянт 990 Инсулино- резистентность 1 020 Коагулограмма (гемостазиограмма) 1 350 Коагулограмма: ААЧТВ; Протромб. время + МНО; Тромб. время; Фибриноген; Антитромбин III; фибринолитическая активность (комплекс) 1 600 Протромбиновый индекс,протромбин по Квику + МНО 390 Протромбиновое время 390 Протеин S 1 560 Протеин C 1 560 Фибриноген 405 РКФМ 320 D- димер 1 390 -
Генетические исследования крови
Наименование услуги Стоимость, ₽ Генетический риск атеросклероза и ИБС, предрасположенность к дислипидемии 7 500 Развернутое генетическое обследование для женщин 12 900 Фармакогенетика Варфарин 3 200 Синдром Жильбера 3 300 Синдром Жильбера расширенный 3 700 Генетика метаболизма Лактозы 1 550 Prenetix- не инвазивная пренатальная диагностика 28 000 Риск развития сахарного диабета 1 типа 12 700 Риск развития сахарного диабета 2 типа (определение вариантов в генах TCF7L2,PPARG, ADIPOQ.) 7 900 Кардиогенетика Гипертония 4 850 Кардиогенетика Тромбофилия 3 630 Генетика метаболизма Фолатов 3 200 Мужское бесплодие: Определение генетических причин азооспермии 2 500 Женское бесплодие 20 700 Беременность(комплекс) — риск невынашивания 3 700 Преэклампсия. Оценка риска 5 800 HLA генотипирование 2 класса для пары ( цена за 1 человека) 4 700 Аналитическое заключение врача- генетика по одному профилю 2 500 Комплекс «Акне» 28 050 Кариотип (1 пациент) 5 000 Кариотипирование с выявлением аберраций 5 400 Кариотип супружеской пары 9 200 Кариотипирование с выявлением аберраций с фото хромосом 6 500 Кариотип с фото хромосом (1 пациент) 6 500 Кариотип супружеской пары с фото хромосом 9 000 Кариотип с выявлением аббераций хромосом (супружеской пары)- с фотографией 11 000 -
Гормональные исследования крови
Наименование услуги Цена, ₽ Фертильность и репродукция
Антитела к овариальным (текальным) антигенам 1 520 Антимюллеров гормон (АМГ) 1 580 17- ОН прогестерон 760 Бета — ХГЧ 890 Глобулин, связывающий половые гормоны ГСПГ 980 Дигидротестостерон 1 590 Ингибин- А 3 300 Ингибин- В 1 690 Лютеинизирующий гормон (ЛГ) 595 Макропролактин (при концентрации пролактина более 700 мЕд/л) 1 230 Прогестерон 595 Пролактин 595 Свободный тестостерон 1 290 Тестостерон 595 Фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) 595 Экстрадиол 595 Экстрадиол свободный 980 Гормоны надпочечников
Анренокортикотропный гормон (АКТГ) 930 Альдостерон 1 050 Андростендион 1 420 ДГЭАС (Дегидроэпиандростерон сульфат) 1 420 Кортизол 595 Адреналин Норадреналин Гормоны щитовидной железы
Т4 общий 595 Т4 свободный 595 Т3 общий 595 Т3 свободный 595 Тиреотропный гормон (ТТГ) 595 ТГ (тиреоглобулин) 870 Тиреоглобулин (ТГ) 950 Другие гормоны
Циклический цитруллиновый пептид (АЦЦП, А-CCР) — ревматоидный артрит 1 430 Глюкозотолерантный тест. Инсулин (ГТТ) (диагностика сахарного диабета) 650 Лептин 1 150 Р1NP (маркер формирования костного матрикса) 1 380 Остеокальцин (неколлагеновый белок костного матрикса) 1 210 Ренин + ангиотензин I 1 090 Ренин (маркер гипокалиемии и гипертонии) 1 390 С- пептид (маркер углеводного обмена) 650 Соматотропный гормон (СТГ) 1 590 Соматомедин С 1 350 -
Забор материала
Наименование услуги Стоимость Забор биологического материала 390 ₽ Забор биологического материала: кровь из вены 390 ₽ Забор биологического материала: кровь из пальца 390 ₽ Забор биологического материала: мазок 390 ₽ Забор биологического материала: секрет простаты 390 ₽ -
Иммунные исследования
Наименование услуги Цена, ₽ Исследования основных параметров клеточного иммунитета: подсчет лейкоцитов, лимфоцитов, нетрофилов, CD3, CD4, CD8, CD16, CD20, CD56, CD4/CD8, CD19
3 800
Расширенное иммунологическое исследование клеточного иммунитета: подсчет лейкоцитов, лимфоцитов, нейрофилов, CD3, CD4, CD8, CD16, CD20, CD38, CD54, CD71, CD95, CD56, CD4/CD8, CD19, CD95
5 900
Иммуноглобулины A, M, G 850 Иммуноглобулины A (IgA) 380 Иммуноглобулины М (IgM) 380 Иммуноглобулины G (IgG) 380 Иммуноглобулины E (IgE) 780 С3 компонент комплемента 870 С4 компонент комплемента 870 Общие циркулирующие имунные комплексы (ЦИК) 1 010 НСТ- тест, латекс- тест (фагоцитоз) 610 -
Иммуногематология (групповая принадлежность крови)
Наименование услуги Цена, ₽ Группа крови, резус-фактор
850
Антитела к резус-фактору (титр)
1 280
Антигены системы Kell (определение группы крови по наличию белка К) 1 090 Фенотипирование эритроцитов по антигенам С, с, E, e, Cw , K, k
1 610 -
Интерфероновый статус
Наименование услуги Цена, ₽ Интерфероновый статус без определения чувствительности лейкоцитов к препаратам 3 400 Роферон 630 Амиксин 630 Неовир 630 Циклоферон 630 Галавит 630 Гепон 630 Иммуномакс 630 Ликопид 630 Полиоксидоний 630 Ридостин 630 Кагоцел 630 Имунофан 630 Арбидол 630 Глутоксим 630 Тактивин 630 Тимоген 630 Иммунал 630 Имунорикс 630 -
Исследование кала
Наименование услуги Стоимость, ₽ Анализ кала общий (копрограмма) 620 Анализ кала на определение панкреатической эластазы 2 350 Анализ кала биохимический на дисбактериоз 1 910 Исследования микробиома человека толстой кишки (просветная кишка) методом ГХ – МС (по Осипову) 4 700 Анализ кала на простейшие и яйца гельминтов 440 Анализ кала на простейшие и яйца гельминтов ПАРАСЕП 920 Кальпротектин в кале 2 900 Анализ на энтеробиоз 430 Анализ кала на скрытую кровь 440 Токсины А и В Clostridium difficile 1 100 Ar Helic.pylori в кале 850 Исследования микробиома человека толстой кишки (просветная микробиота) ГХ — МС (по Осипову ) 4 700 -
Исследования мочи
Наименование услуги Цена, ₽ Биохимия мочи
Амилаза (суточная моча) 310 Альбумин (микроальбуминурия) 450 Белок общий 320 Глюкоза (суточная моча) 330 Креатинин 270 Микроальбумин (разовая моча) 500 Микроальбумин 760 Мочевая кислота 330 Мочевина 330 Органические кислоты в моче 5 700 Гормоны в суточной моче
17-кетостероиды (17-КС) 1 800 Кортизол (суточная моча) 1 120 Свободный кортизол (моча) 1 990 Тест на беременность по моче 240 Катехоламины мочи
Адреналин 650 Метанефрины (суточная моча) 3 350 Норметанефрины (суточная моча) 1 700 Норадреналин 650 Катехоламины: адреналин, норадреналин, дофамин (суточная моча) 1 850 Метаболиты катехоламинов и серотонина (ГВК, ВМК, 5-ОИУК ) 1 800 Промежуточные метаболиты катехоламинов (метанефрин и норметанефрин ) 2 100 Нейромедиаторы в суточной моче
5-оксииндолуксусная кислота (моча) 1 200 Ванилилминдальная кислота (моча) 1 200 Гистамин (моча) 1 200 Дофамин (моча) 650 Серотонин (моча) 1 200 Клинические исследования мочи
Общий анализ мочи — срок изготовления 1 день 410 Общий анализ мочи — (срочно) в день обращения 490 2-х стаканная проба мочи 630 Анализ мочи по Нечипоренко — срок изготовления 1 день 450 Анализ мочи по Нечипоренко — (срочно) в день обращения 550 Патологические маркеры мочи
UBC (специфический антиген рака мочевого пузыря) (моча) 1 400 Альфа-амилаза панкреатическая (моча) 330 ДПИД (дезоксипиридинолин) (моча) 1 570 Тест на протеинурию (альбумин/креатинин) в разовой порции мочи 450 Микроэлементы в моче
13 микроэлементов в моче (Se; Zn; Co; Mn; Mg; Cu; Fe; Ca; Hg; As; Pb; Cd; Al) 4 500 6 микроэлементов в моче ( Hg; Cd; As; Li; Pb; Al) 2 500 Аминокислоты (32) в моче 6 590 Калий/Натрий/Хлор 350 Кальций 230 Магний 330 Фосфор 330 -
Клинические исследования крови
Наименование услуги Цена, ₽ Общий анализ крови без лейкоцитарной формулы (капилярная кровь) 400 Общий анализ крови буз лейкоцитарной формулы (венозная кровь) 400 Клинический анализ крови 3 (гемоглобин, лейкоциты, СОЭ) 730 Клинический анализ крови (развёрнутый) 730 Клинический анализ крови (развёрнутый+ тромбоциты) 730 -
Общеклиническое исследование отделяемого
Наименование услуги Цена, ₽ Посткоитальный тест 640 Мазок на флору 600 Мазок из носа на эозинофилы 400 Общеклиническое исследование назального секрета (риноцитограмма) 850 Соскоб шейки матки и/или цервикального канала по Лейшману-1препарат 670 Исследование пунктатов молочной железы и кожи 670 Исследование отделяемого молочной железы 670 Исследование пунктатов щитовидной железы 670 Анализ спермограммы с исследованием антиспермальных антител IgA\ IgG ( MAR — тест) 3 920 Жидкостная цитология 2 200 Определение онкомаркера в жидкостной цитологии 5 100 Биопсия исследование 1 фрагмента (гисталогия) 3 870 Соскоб с кожи на грибы 750 Соскоб с ногтевых пластинок на грибы 750 Соскоб на демодекс 750 Соскоб с кожи на чесоточного клеща 750 Соскоб на трепонему 750 Анализ спермограммы 1 990 Общеклиническое исследование сока предстательной железы 600 -
Онкомаркеры
Наименование услуги Цена, ₽ АФП (Альфа-фетопротеин). Оценка патологии плода при беременности, гепатоцеллюлярного рака печени, опухолей яичек или яичников 1 600 Антитела к митохондриям (Антимитохондриальные IgG, маркер первичного билиарного цирроза печени) 1 430 Гастрин-17 (диагностика атрофическиого гастрита, маркер рака и язвенной болезни желудка) 1 870 Индекс ROMA — оценка риска рака яичников у женщин (CA-125 и HE 4) 2 560 Исследование полеморфизов в гене ТР53 (рак молочной железы) 4 500 Инсулин (маркер гормоносекретирующей опухоли бета-клеток поджелудочной железы) 650 Проинсулин 1 280 Кальцитонин (диагностика остеопороза, маркер опухоли щитовидной железы)
990 ПСА (простатический специфический антиген) общий 690 ПСА общий/свободный (простатический специфический антиген общий, маркер рака предстательной железы) 1 390 Оценка здоровья простаты (включает три маркера: ПСА общего, ПСА свободного и про-ПСА) 3 600 РЭА (раковоэмбриональный антиген) 700 Рак молочной железы 4 300 Рак молочной железы и яичников (расширенный комплекс) 21 990 CA 153 (маркер рака молочной железы) 1 030 CA-125 (маркёр рака яичников) 1 010 CA 19-9 (маркёр рака кишечника, желудка, поджелудочной железы, желчного пузыря) 1 020 CA-242 (маркёр рака поджелудочной железы, толстого кишечника, прямой кишки, колоректального рака) 2 100 Cyfra-21-1 (маркер немелкоклеточного рака легких) 1 530 HE-4 (маркёр для комплексной диагностики эпителиального рака яичников) 1 480 SCC (Антиген плоскоклеточного рака) 1 400 Тиреоглобулин (маркер щитовидной железы) Паратиреоидный гормон (ПТГ) (маркер гиперпаратиреоза) 930 -
ПЦР диагностика. ПЦР NASBA (соскоб)
Наименование услуги Цена, ₽ ПЦР 10 2 950 ДНК Listeria monocytogenes (ПЦР) 850 ДНК Listeria monocytogenes (кровь) 450 Бакретиальный вагиноз колич. 650 Вирус простого герпеса 6 типа (HHV), количественно ДНК 400 ВРИ микоплазма / хламидии кач. 550 ВПЧ от 420 Вирус Варицелла-Зостер 420 Гонорея кач. 420 Гарднерелла кач. ДНК 420 Гарднерелла колич. ДНК 610 Герпес 1/2 (HSV)- кач. ДНК 420 Кандидоз кач. ДНК 420 Микоплазма genitalium- кол. ДНК 650 Микоплазма hominis – кол.ДНК 650 Микоплазма hominis- кач. ДНК 420 Микоплазма genitalium- кач. ДНК 420 Стрептококк группы В 1 280 Стрептококк группы А кач. 900 Соскоб с гортани на Mycoplasma / Chlamidia (pneumoniac) 610 Трихомонада 420 Уреаплазма кач. ДНК 420 Уреаплазма колич. 650 Хламидия кач. ДНК 420 Хламидия кол. 650 Флороценоз микоплазмы 740 Флороценоз 1 690 Флороценоз и Микроскопия 1 880 Флороценоз и NCMT 1 980 Флороценоз и NCMT и Микроскопия 2 610 Цитомегаловирус кач. 420 ЦМВ / ВЭБ /ВПГ 6 типа кач. 850 Цитомегаловирус, количественно, ДНК 300 Эпштейна-Барр, количественно, ДНК 350 ПЦР NASBA. Ранняя диагностика ЗППП (соскоб)
900 ANCA – цитоплазма IgG полуколичественный 1 760 NASBA chlamidia trachomatis 2 370 NASBA neisseria gonorrhoeae 2 370 NASBA trichomonas vaginalis 2 370 -
Ранняя диагностика заболеваний ЭЛИ-ТЕСТ
Наименование услуги Стоимость «ЭЛИ-Висцеро-Тест-24» (ранняя диагностика, полная панель) нервной системы, миокарда, печени, почек, надпочечников лёгких, стенок желудка, кишечника, щитовидной железы, поджелудочной железы, простаты, тромбоцитов, эндотелия сосудов, а также к антигенам, характеризующие состояние иммунной системы. 6 950 ₽ «ЭЛИ-В-Тест -6» (общее состояние иммунной системы при подготовке к вакцинации) 2 000 ₽ «ЭЛИ-Диа-Тест-8» (состояние поджелудочной железы, сахарный диабет; общая терапия и эндокринология; уточняющий диагноз и оценка эффективности лечения) 2 100 ₽ «ЭЛИ-ЖКТ- Тест -12» (состояние органов системы пищеварения; гастроэнтерология; общая терапия; гепатология; эндокринология; уточняющий диагноз и оценка эффективности лечения) 2 600 ₽ «ЭЛИ-П-Комплекс-12» (репродуктивное здоровье женщины) 2 840 ₽ «ЭЛИ- Тест-12» (мужское здоровье ) 2 640 ₽ «ЭЛИ-АФС-ХГЧ Тест» (антифосфолипидный синдром, анти-ХГЧ синдром, состояние иммунной системы; акушерство и общая терапия; уточняющий диагноз и оценка эффективности лечения) 1 850 ₽ Цитотест. Индивидуальный цитотоксический тест на переносимость 21 химического реагента (консерванты, красители, загустители, ароматизаторы) 5 000 ₽ «ЭЛИ-АНКОР-Тест -12» (состояние сердечнососудистой системы)- предназначен для клинического использования в общей терапии, кардиологии и флебологии для оценки выраженности патологических процессов,нарушающих нормальное функционирование сердечно-сосудистой системы. 2 600 ₽ «ЭЛИ-Н-Тест-12» (состояние нервной системы) 2 600 ₽ -
Серологическая диагностика (антитела)
Наименование услуги Цена, ₽ ВИЧ
Антитела к вирусу иммунодефицита человека 1 и 2 типов (ВИЧ) 600 ВИЧ –ДНК (ПЦР), качественное определение 3 630 ВИЧ –определение РНК вируса , кол. 12 150 Гепатит А (HAV):
anti- HAV IgG, ИФА, кач. 720 anti- HAV IgМ, ИФА, кач. 900 Гепатит B (HBV):
ДНК HBV, кровь, кач. ПЦР 360 HbsAg, ИФА, кач. 600 анти- HВsAg, кол. 1 300 anti- HBc ИФА cуммар., кач. 520 anti- HBc IgM, ИФА, кач. 850 HBeAg, ИФА, кач. 720 Гепатит C (HCV):
РНК HCV, кровь, генотипирование (1a, 1b, 2a, 2b, 3a) ПЦР 1 300 anti- HСV IgМ, ИФА, кач. 600 anti- HСV суммарные, ИФА, кач. 400 РНК HСV , кач. 755 РНК HСV , кол. 9 190 Гепатит D (HDV):
anti- HDV IgМ, ИФА, кач. 750 ₽ anti- HDV, ИФА, сумм., кач. 750 ₽ Антимитохондриальные антитела (АМА) 1 450 ₽ Антитела к микросомальной фракции печени и почек (LKM) 1 100 ₽ Гепатит Е
Антитела к вирусу гепатита Е (IgG) 845 Антитела к вирусу гепатита Е (Ig М) 845 Сифилис
RW РПГА 520 Антитела к Treponeme pallidum методом РИФ в сыворотке крови 2 910 Антитела к Treponeme pallidum РИБТ 3 960 Антитела IgG к Treponeme pallidum методом иммуноблокинга (WB) в сыворотке крови 4 100 Антитела IgM к Treponeme pallidum методом иммуноблокинга (WB) в сыворотке крови 4 100 Антитела к Treponeme pallidum в реакции миккропреципитации с кардиолипиновым антигеном (RPR/РМТ) в сыворотке крови 900 Антитела к Treponeme pallidum (IgM) 810 Антитела к Treponeme pallidum (IgG) 810 Герпесвирусы
Антитела IgM к цитомегаловирусу 840 Антитела IgG к цитомегаловирусу 840 Авидность антител IgG к цитомегаловирусу 1 155 Антитела IgG к раннему антигену вируса Эпштейна-Барр
755 ВЭБ IgG (к ядерному антигену) 1 050 ВЭБ количественный, определение ДНК 550 ВЭБ IgG (к капсидному белку) 840 ВЭБ IgМ (к капсидному белку) 840 ВЭБ IgG (к раннему белку) 970 Варицелла-Зостер (Anti- VZV IgG) 880 Варицелла-Зостер (Anti- VZV IgM) 765 Антитела к вирусу простого герпеса 1 и 2 типа (HSV) кач.определение ДНК 465 Антитела IgG к вируса простого герпеса 1 и 2 типа (кол.) 790 Антитела IgМ к вируса простого герпеса 1и 2 типа 790 Антитела IgМ к вируса простого герпеса 1 типа (кол.) 490 Авидность АТ IgG к герпесу 1, 2 типа 1 330 Антитела к вирусу герпеса 6 типа IgM 1 170 ВПГ 1 и 2 тип (кол) IgG 960 ВПГ 1 и 2 тип (кол) IgM 790 Моликуты
Микоплазма пневмонии IgG 600 Микоплазма пневмонии IgA 840 Микоплазма пневмонии IgM 600 Микоплазма хоминис IgA 840 Микоплазма хоминис IgM 840 Микоплазма хоминис IgG 840 Хламидии
Хламидии пневмонии IgA 760 Хламидии пневмонии IgM 760 Хламидии пневмонии IgG 760 Другие вирусные инфекции
Вирус Зика (ПЦР (эякулят) 1 500 Вирус Зика (ПЦР (ЭДТА+ слюна+ моча) 4 200 Антитела к бета- клеткам поджелудочной железы 1 330 Антитела к глутаматдекарбоксилазе (АТ к GAD) 1 450
Индивидуальный подход к лечению каждого пациента
Использование инновационного оборудования и аппаратуры
Лечение эректильной дисфункции (импотенции) ударно-волновым методом
Полный спектр лабораторной и функциональной диагностики
О клинике «евромедпрестиж»
Специально для сохранения и восстановления здоровья людей в 2000 году была основана
многопрофильная клиника «ЕВРОМЕДПРЕСТИЖ», в которой работают лучшие специалисты из 25 областей
медицины. Наши врачи, в совершенстве владеющие своим ремеслом, готовы бороться с любым Вашим недугом!
Мы заботимся о вашем здоровье с вниманием и любовью и поэтому нас рекомендуют друзьям
Васько Наталья Валерьевна, Управляющий партнер клиники «Евромедпрестиж»
Благодарим Вас
за доверие!
- Лабораторные методы обнаружения инфекций
- Этапы диагностики методом ПЦР
- Что может ПЦР
- Чего не может ПЦР
- Выводы
Полимеразная цепная реакция (ПЦР, PCR), открытая американцем Кэрри Муллисом в 1983 году, и метод детекции ДНК, разработанный на ее основе, принесли ученому Нобелевскую премию по химии 1993 года. Сегодня это один из самых точных методов в лабораторной диагностике инфекционных заболеваний. Он позволяет обнаружить то, что до появления ПЦР оставалось скрытым.
Почему же такой замечательный метод не вытеснил другие виды лабораторной диагностики, а применяется наравне с ними, и в чем-то даже проигрывает им?
Лабораторные методы обнаружения инфекций
Существуют разные методы обнаружения инфекций в биологических жидкостях пациентов.
- Микроскопические методы.
Лаборант при помощи микроскопа выискивает патогенные микроорганизмы в специально окрашенном мазке — пробе выделений из мочеиспускательного канала или со стенки слизистой. Дешево, просто, но малоинформативно. Таким образом, удается разглядеть трихомонад, гонококков, хламидий, уреаплазму и гарднерелл. И все.
- Культуральные методы (посевы).
Такой же точно мазок наносят на питательную среду в чашке Петри и смотрят, что вырастет. Все микроорганизмы образуют разные колонии — по цвету, форме, размеру и консистенции. Вот по этим колониям и определяется: кто был в мазке. Тоже, в общем, недорого, но долго, выращивание микроорганизмов может длиться от 3 до 8 недель – за это время состояние пациента может значительно ухудшиться. И еще есть один нюанс: вырастет только то, что было в мазке и в определенном количестве. Если патогенных бактерий было слишком мало, то выявить их не удастся.
- Анализы крови.
Любые возбудители оставляют после контакта с организмом человека свои иммунные следы в его крови: антигены или антитела. Метод не самый дешевый, зато быстрый. Но и тут следует учитывать, что до определенного момента инфекция уже может быть в организме, а антитела и антигены пока еще не выявляются: слишком мало времени прошло или слишком низкая концентрация патогенных микроорганизмов. Кроме того, данный метод не позволяет различать виды отдельных микроорганизмов, которые далеко не всегда опасны для человека.
Итак, у всех методов есть свои недостатки. Среди ключевых можно выделить следующие:
- Низкая чувствительность, то есть необходимо определенное минимальное количество микроорганизмов в пробе, чтобы их можно было обнаружить.
- Низкая специфичность, то есть, если у двух разных видов бактерий (один опасный, другой нет) на поверхности клетки есть одинаковые белки, то не все анализы позволяют узнать, какой именно из этих видов имеется в организме.
Обе этих проблемы позволяет решить метод ПЦР.
Этапы диагностики методом ПЦР
В основе метода лежит факт, что каждый живой организм (микро- или макро-) имеет уникальную ДНК (или РНК – если речь идет о некоторых вирусах). Это лучший маркер присутствия чужеродного микроорганизма в теле человека, какой только можно себе представить. Даже если в пробе присутствуют следовые количества ДНК, значит организм тем или иным способом уже сталкивался с данной инфекцией. А как эти следовые количества «увидеть»? Их нужно для начала «приумножить».
Метод ПЦР состоит из следующих этапов.
- 1 этап. Подготовка пробы, то есть выделение ДНК.
Предположим, что мы ищем в пробе определенную бактерию, например, хламидию (Chlamydia trachomatis – возбудитель хламидиоза). На этом этапе мы не знаем, есть ли в пробе ее ДНК. Проба специальным образом обрабатывается, чтобы сконцентрировать ДНК, если она там есть, в минимальном объёме жидкости для ПЦР.
- 2 этап. Амплификация (умножение) ДНК с помощью ПЦР.
Сначала двухцепочечную ДНК «расплетают» путем повышения температуры и получают одноцепочечные нити. После этого в раствор добавляют специальные короткие фрагменты нуклеиновой кислоты — праймеры. Они будут затравкой для синтеза второй цепочки ДНК на одноцепочечной «базе». Итак, база есть, затравка есть, осталось добавить нуклеотиды, из которых будет достраиваться вторая цепочка, и устройство, которое будет заниматься этим строительством. В роли такого устройства выступает фермент ДНК-полимераза, а процесс достраивания одноцепочечной ДНК до двухцепочечной и является полимеразной цепной реакцией.
В начале цикла у нас было две одноцепочечных ДНК, в конце мы получим две двухцепочечных ДНК. И такой цикл повторяется многократно, пока количество ДНК не окажется достаточным для лабораторного анализа. Для умножения ДНК используют специальные аппараты — амплификаторы. На этом этапе исследователи тоже все еще не знают, что за ДНК они амплифицировали и есть ли в пробе ДНК хламидии.
Следует также добавить, что существует множество разновидностей метода ПЦР, которые применяются в зависимости от поставленной перед исследователем задачи.
- 3 этап. Детекция (определение) ДНК.
На данном этапе как раз и происходит выяснение, есть ли ДНК искомой бактерии в пробе. Раньше для этого использовался метод электрофореза, а позднее ученые стали использовать ДНК-зонды – специальные меченые фрагменты ДНК, которые взаимодействуют только со специфическим участком анализируемой ДНК и позволяют таким образом определять конкретные последовательности нуклеотидов. Наконец, для экспресс-диагностики сейчас используют флуоресцентные маркеры, которые позволяют определять результат ПЦР прямо в реакционной пробирке. Если ДНК хламидии в пробе была – лаборант об этом узнает.
А что делать, если геном вируса представляет собой не ДНК, а РНК? Пример: пандемический коронавирус SARS-CoV-2. В этом случае добавляется еще один этап — обратная транскрипция. Из образца слизи, полученного из носоглотки, выделяют РНК, проводят обратную транскрипцию и получают аналог в виде ДНК. И уже эту ДНК амплифицируют и детектируют. Поэтому говорят, что для определения коронавируса используют полимеразную цепную реакцию с обратной транскрипцией в реальном времени (ОТ-ПЦР в реальном времени).
Что может ПЦР
Метод ПЦР позволяет выявлять патогенные микроорганизмы, а также проводить анализ на предмет их резистентности (устойчивости) к лекарствам. В этом отношении, по сравнению с культуральными и другими методами, ПЦР намного быстрее и точнее. Методы ПЦР находят все более широкое применение в медицинской практике. Например, сейчас с его помощью в некоторых случаях можно определить наличие (или отсутствие) генетических маркеров резистентности.
Преимущества ПЦР:
- Чувствительность.
Для обнаружения присутствия патогенного микроорганизма в теле пациента достаточно даже одной копии его ДНК. 1 микроорганизм на пробу – для ПЦР этого достаточно, подобный подход невозможен для других методов диагностики.
- Специфичность.
Как было сказано ранее, уникальность ДНК каждого вида микроорганизмов позволяет обнаружить их даже при наличии больших объёмов чужой, лишней, мешающей проведению анализа, «балластной» ДНК.
- Скорость проведения анализа.
Весь процесс диагностики методом ПЦР занимает не больше 1 рабочего дня.
- Производительность.
ПЦР-диагностика, на сегодняшний день, полностью автоматизированный процесс.
Чего не может ПЦР
Метод ПЦР — это действительно гениальное изобретение молекулярной биологии XX века. Но иногда он настолько хорош, что непригоден для диагностики.
Недостатки ПЦР:
- Специфичность.
Она потрясающе высокая, но слишком узкая. При посеве в чашке Петри вырастет все, что было в пробе. А при проведении ПЦР можно обнаружить только то, что искали, то, для чего использовали ДНК-зонды. Нельзя проводить ПЦР-анализ на хламидии и случайно обнаружить гепатит.
- Чувствительность.
Существует множество микроорганизмов, которых врачи относят к условно-патогенным. Они являются частью нормальной микрофлоры человека, пока их концентрация не превышает определенных пределов. ПЦР конечно покажет их наличие, но это вовсе не значит, что человек болен. К таким микроорганизмам относятся микоплазма, уреаплазма, гарднерелла и др.
- Проблема контаминации.
Контаминация – это загрязнение пробы образцами ДНК извне. Диагностика методом ПЦР должна проводиться в специально подготовленных лабораториях и в стерильных условиях. Даже одна копия «внешней» ДНК из другой пробы, из воздуха лаборатории или с перчаток лаборанта может привести к ложноположительным результатам – при наличии соответствующих праймеров.
- Влияние на ПЦР других компонентов пробы.
Чувствительность ПЦР может значительно снижаться под воздействием других веществ. Например, некоторые препараты (антикоагулянты) подавляют реакцию амплификации. Для выявления таких ситуаций существуют специальные методы контроля. Но риск получения ложноотрицательных результатов все равно остается.
- Стоимость.
Это дорогостоящий метод. Само оборудование и реактивы для него, а также подготовка лаборантов, умеющих с ними обращаться, обходятся клиникам и лабораториям очень дорого. В России подобное оборудование не производится, а применение отечественных реактивов ухудшает качество анализа.
Выводы
- ПЦР – отличный современный и недешевый метод диагностики возбудителей различных инфекционных заболеваний.
- Не всегда для диагностики требуется метод ПЦР. Если врач не считает нужным направлять вас на анализ – доверьтесь его мнению. При самолечении и самостоятельной сдаче анализов для исследования методом ПЦР в сетевой лаборатории высок риск того, что вы будете годами лечиться от несуществующей болезни.
- Если лаборатория выдала вам результат, в котором вы сомневаетесь, пересдайте анализ в другой лаборатории. Риски ложноположительных и ложноотрицательных результатов никто не отменял – несмотря на всю современность и технологичность метода.
Клиническая лабораторная диагностика: национальное руководство / Под ред. В. В. Долгова, В. В. Меньшикова. – 2012
ИНФЕКЦИОННЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ВЛАГАЛИЩА И СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ИХ ДИАГНОСТИКЕ И ЛЕЧЕНИЮ / Савичева А.М., Шипицына Е.В., Воробьева Н.Е. // Акушерство и гинекология – 2016 – 2
Государственное
образовательное учреждение высшего
профессионального образования «ПЕРМСКАЯ
ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ
имени академика Е.А. Вагнера федерального
агентства по здравоохранению
и
социальному развитию»
С.В. Поспелова, м.В. Кузнецова Полимеразная цепная реакция Методические рекомендации
Пермь
2007
УДК 616-078.33
ББК 53.4
Авторы:
С.В.
Поспелова
– канд. мед. наук, доцент кафедры
микробиологии, вирусологии и иммунологии,
М.В.
Кузнецова
– канд. биол. наук, сотрудник ИЭГМ УрО
РАН
Поспелова,
С.В.
Полимеразная
цепная реакция: метод. рекомендации /
С.В. Поспелова,
М.В. Кузнецова; ГОУ
ВПО ПГМА
им. ак. Е.А. Вагнера Росздрава.
– Пермь, 2007. – 35 с.
Предназначены
для самостоятельной работы студентов
всех факультетов: лечебного, педиатрического,
медико-профилактического, стоматологического
и факультета высшего сестринского
образования (ФВСО) медицинской академии.
Рецензент:
зав.
кафедрой биологии, экологии и медицинской
генетики ПГМА, профессор А.Б.
Виноградов
Печатается
по решению центрального координационного
методического совета ГОУ ВПО ПГМА
им. ак. Е.А. Вагнера Росздрава
УДК 616-078.33
ББК 53.4
© Поспелова С.В.,
Кузнецова М.В., 2007
© ГОУ ВПО ПГМА им.
ак. Е.А. Вагнера Росздрава, 2007
Полимеразная цепная реакция в клинической микробиологической диагностике
Современная
медицина успешно использует достижения
естественных наук, интенсивно применяет
новые
технологии для диагностики и лечения
заболеваний. В последнее время к
традиционным микробиологическим и
иммунологическим методам лабораторной
диагностики инфекционных заболеваний
добавились новые, основанные на
использовании молекулярно-генетических
технологий.
Применение этих методов не только в
научных целях, но и в практической
лабораторной
диагностике стало возможным в немалой
степени благодаря созданию в середине
80-х
годов процесса искусственного
многократного копирования ДНК и
дальнейшему стремительному
развитию этой технологии, в настоящее
время известной как полимеразная
цепная реакция
(ПЦР).
Менее чем за 15 лет своего существования
ПЦР сделала рутинным анализ специфических
ДНК-последовательностей многих
патогенных микроорганизмов.
Универсальность,
высокая чувствительность и относительная
простота исполнения сделали метод ПЦР
незаменимым для решения различных задач
клинической диагностики, таких как
прямое обнаружение
и идентификация возбудителей заболеваний,
молекулярное типирование и исследование
свойств патогенных микроорганизмов,
анализ мутаций, связанных с генетическими
заболеваниями
у человека, идентификация личности
человека.
Что такое пцр?
Полимеразная
цепная реакция (ПЦР)
— искусственный процесс многократного
копирования (амплификации)
специфической
последовательности ДНК, осуществляемый
in
vitro
(рис. 1).
Копирование
ДНК при ПЦР осуществляется специальным
ферментом — ДНК-полимеразой,
как
и в клетках
живых организмов. ДНК-полимераза,
двигаясь по одиночной цепи ДНК (матрице),
синтезирует
комплементарную ей последовательность
ДНК. Важно, что ДНК-полимераза не может
начать
синтез цепи ДНК «с нуля», ей необходима
короткая «затравочная» цепь РНК или
ДНК, к которой
она может начать присоединять нуклеотиды.
Основной принцип ПЦР состоит в том, что
реакция
полимеризации (синтеза полимерной цепи
ДНК из мономерных нуклеотидных звеньев)
инициируется
специфическими праймерами
(короткими
фрагментами «затравочной» ДНК) в каждом
из множества повторяющихся циклов.
Специфичность ПЦР определяется
способностью праймеров «узнавать»
строго определенный участок ДНК и
связываться с ним согласно принципу
молекулярной
комплементарности.
В
обычной реакции ПЦР используется пара
праймеров, которые «ограничивают»
амплифицируемый участок
с двух сторон, связываясь с противоположными
цепями ДНК-матрицы. Для многократного
увеличения
количества копий исходной ДНК нужна
цикличность реакции. Как правило, каждый
из последовательно
повторяющихся циклов ПЦР состоит из
трех этапов:
1)
денатурации, или
«плавления» двуцепочечной ДНК: перед
началом реакции ДНК-мишень является
двуцепочечной, при температуре 94-950
С комплиментарные цепи ДНК расходятся
— переходят
в одноцепочечное состояние;
2)
связывания (отжига)
праймеров:
при температуре, оптимальной для
выбранных праймеров, происходит их
связывание с комплиментарным участком
матричной ДНК;
3)
элонгации, или
удлинения цепи: ДНК-полимераза присоединяет
нуклеотиды к праймерам, синтезируя
новые цепи ДНК, которые становятся
мишенью для праймеров в последующих
циклах ПЦР.
Смена
этапов каждого цикла осуществляется
путем изменения температуры реакционной
смеси (см.
рис. 1).
Рис.
1. Основные этапы цикла ПЦР
Сначала
праймеры могут связаться только с
определенной последовательностью
исходной ДНК, но в последующих циклах
они связываются с копиями этой
последовательности, синтезированными
в предыдущих циклах. При этом количество
основного продукта ПЦР (копии
последовательности ДНК, ограниченной
праймерами) теоретически удваивается
в каждом цикле. Если на начальном цикле
в исследуемом материале была только
одна ДНК-мишень, после первого цикла
будет уже две копии, после двух циклов
– 4 копии, результатом третьего цикла
будет 8 копий, а тридцать пятого – уже
68 биллионов копий (рис. 2).
Рис.
2. Процесс многократного копирования
ДНК-мишени в ходе последовательно
сменяющихся циклов
Основным
методом анализа продуктов реакции,
который традиционно применяется во
многих лабораториях для обнаружения
амплифицированной ДНК и определения
ее размера, является метод гель-электрофореза
с
последующим окрашиванием красителем,
специфичным к ДНК, например бромистым
этидием (рис. 3).
Контроль
– различные фрагменты ДНК с известным
количеством составляющих их нуклеотидов.
Известно, что дистанция между различными
фрагментами имеет логарифмическую
зависимость от их размера, массы. Линия
1 – обнаружены ПЦР-фрагменты длиной
приблизительно 1850 оснований. Линия 2 и
4 – фрагменты длиной около 800 оснований.
Рис.
3. Анализ продуктов реакции методом
гель-электрофореза
Линия
3 – не выявлены искомые фрагменты,
отрицательный результат реакции. Линия
5 – множественные линии сформировались
потому, что праймеры оказались
комплиментарны к нескольким фрагментам
ДНК различной длины: около 550, 800 и 1500
оснований.
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #